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丁香通

请大佬看一下qpcr amplification plot曲线

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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我就是这个雯

实验小白,跑了两次qPCR,曲线都和别人不太一样,不知道是哪里出了问题,求大佬指点

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4 个回答

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天一湖医者

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一是扩增信号太弱,经系统矫正后,就产生这样抖啊抖的线,小 V 建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题,可能在扩增过程中仪器出现了波动或者本身该检测孔出现了异常。

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bamboopiggy

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感觉是你的cdna的稀释出了问题,那些起峰早的,是不是浓度过高了?

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balalaLy

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扩增曲线异常,可能是模板量太低了

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Eason老歌迷

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这种曲线处理不是pcr的常规操作吗?通过对曲线各个参数的统计,可以判断实验定量的准确程度或者试剂的稳定程度。其主要包括三个参数:Slope(斜率)、Intercept(截距)和R2(线性相关性)。模板DNA量越多,荧光达到域值的循环数越少,即Ct值越小。标准品与待测样本的扩增效率一致。 Log(浓度)与循环数呈线性关系,通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,根据样品Ct值,就可以计算出样品中的起始模板量。Slope(斜率):理论值为-3.32。可以从两个方面来分析,首先是标准曲线的10倍梯度关系,如果梯度正确,斜率数值会比较接近理论值;其次是试剂的扩增效率,当梯度正确的情况下,扩增效率越高越接近理论值。Intercept(截距):不同公司的试剂截距有很大的不同,主要是指只有1个病毒扩增时,曲线出现的Ct值。R2(线性相关性):指示本次实验标准品的线性关系。注:优质试剂的标准品每次实验的参数是比较稳定的,做质控分析后偏差应在±2SD范围内,Ct值变异系数应小于10%。

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