求问qPCR的引物如何设计，一般选择哪段序列，探针法和燃料法有什么区别？

可以用NCBI和prime bank设计引物，探针法后面需要跑胶，染料法直接得出数据

我们聊一聊探针法和染料法的区别。

通过探针可以增加反应的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号，能够预测和提前进行反应条件的优化，它的缺点是要合成探针，成本比较高。染料法呢比较经济，可以做溶解曲线，分析全部PCR产物的M值，缺点就是特异性没有探针法高。

染料法是相对定量，有参比基团；探针法是绝对定量，有标准曲线进行对比。很多在做pcr检测时会选择盒子，比较盒子的好坏，例如BIODAI,ABI，罗氏等，染料法不仅要看CT 值，还要看溶解曲线的

1.可以从文献中找，2 从数据库中找，3，自己设计要求跨外显子。探针法还要加探针，比较麻烦，染料法，普适性强