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HELP:如何设计该基因的引物

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1962
我想用RT-PCR扩增出某种纤毛虫的制动抗原基因的全长cds
通过ncbi查到它的全长cds为(1329bp):
ATGAAATATAATATTTTATTAATTTTAATTATTTCTTTATTTATTAATGA ATTAAGAGCTGTTCCATGTCCTGAT GGTACTTAGACTCAAGCTGGATTGA CTGATGTAGGTGCTGCTGATCTTGGTACTTGTGTTAATTG CAGACCTAAT TTTTACTATA ATGGTGGTGCTGCTTAAGGAGAAGCTAATG GTAATTAACC TTTCGCAGCAAATAATGCTGCTAGAGGTATATGTGTACCATGCCAAATAA ACAGAGTAGGCTCTGTTACCAATGCAGGTGACTTAGCTACTTTAGCCACATAATGCAGTACTTAATGTCCTACTGGCACTGCACTTGATGATGGAGTGAC AGATGTTTTTGATAGATCAGCCGCATAATGTGTTAAATGCAAACCTAACT TTTACTATAATGGTGGTTCTCCTTAAGGTGAAGCTCCTGGCGTTTAAGTT TTTGCTGCTGGTGCTGCCGCTGCAGGTGTTGCTGCCGTTACTAGTTAATG TGTACCTTGCCAACTAAACAAAAACGATTCTCCTGCCACTGCAGGTGCCT AAGCTAATTTAGCCACATAATGTAGCAATTAATGTCCTAC TGGCACTGTACTTGATGATGGAGTGACACTTGTTTTTAATACATCAGCCA CATTATGTGT TAAATGCAGACCTAACTTTTACTATAATGGTGGTTCTCCT TAAGGTGAAG CTCCTGGCGTTTAAGTTTTTGCTGCTGGTGCTGCCGCTGC AGGTGTTGCT GCCGTTACTAGTTAATGTGTACCTTGCCAAATAAACAAAA ACGATTCTCC TGCCACTGCAGGTGCCTAAGCTAATTTAGCCACATAATGCAGTACTTAAT GTCCAACTGGCACTGCAATTCAAGACGGAGTGACACTTGT TTTTAGTAATTCATCCACATAATGTTCTTAATGCATTGCTAATTACTTTT TTAATGGTAA TTTCGAAGCAGGTAAAAGTTAATGTTTAAAGTGTCCAGTAAGTAAAACTA CTCCAGCACA TGCTCCAGGTAATACTGCTACTTAAGCCACATAATGTTTG ACCACATGTCCTGCTGGTACAGTACTTGATGATGGAACATCAACTAATTT TGTAGCTTCCGCAACTGAATGTACTAAATGTTCTGCTGGCTTTTTTGCAT CAAAAACAACTGGTTTTACAGCAGGTACTGATACATGTACTGAATGTACTAAAAAATTAACTTCTGGTGCCACAGCTAAAGTATATGCTGAAGCTACTCA AAAAGTATAATGCGCCTCCACTACTTTCGCTAAATTTTTATCGATTTCCT TATTATTTATTTCTTTCTATTTATTGTGA
还找到了该基因的全长序列(DNA 2486bp):
AAATTAAAAAATGTTTTTATTTAATAATATTTTTTCACGT GTAATTATTA TTATTTTTTTTTTAAATAAATTATAAAAAATAAAAAGTAGAAAAATATCA ATAATAAAATATAAAATAAATTTAAAAATTATTTATGATTTGTTTTTAGA AAATAAGGTTTTATTTATAATAATGAATTCTTAAAATAATGAATCGATAT TATATAAATTTTTATTTTTTATAAAATATTGAATTACCTAAAATAATATA AATTTATGAAATATTATTTAAAATAATAAGTTATAGAATAAATTTATTTTTATTTCTAATTTTTTTTATAATTATTAAAA AAAAAAAAAAAATCTATTAC TATTTTGCATTTACAAACGA TAGAAAAAAC TAAAATTTAT AATATTATTA AAAAAAAAAATATAAATAATAATAATAAAAATATGAAATATAATATTTTA TTAATTTTAATTATTTCTTTATTTATTAATGAATTAAGAGCTGTTCCATG TCCTGATGGT ACTTAGACTCAAGCTGGATT GACTGATGTAGGTGCTGCTG ATCTTGGTAC TTGTGTTAATTGCAGACCTAATTTTTACTATAATGGTGGTGCTGCTTAAG GAGAAGCTAATGGTAATTAA CCTTTCGCAG CAAATAATGC TGCTAGAGGTATATGTGTAC CATGCCAAAT AAACAGAGTA GGCTCTGTTA CCAATGCAGG TGACTTAGCTACTTTAGCCA CATAATGCAG TACTTAATGT CCTACTGGCA CTGCACTTGA TGATGGAGTGACAGATGTTT TTGATAGATC AGCCGCATAA TGTGTTAAAT GCAAACCTAA CTTTTACTATAATGGTGGTT CTCCTTAAGG TGAAGCTCCT GGCGTTTAAG TTTTTGCTGC TGGTGCTGCCGCTGCAGGTG TTGCTGCCGT TACTAGTTAA TGTGTACCTT GCCAACTAAA CAAAAACGATTCTCCTGCCA CTGCAGGTGC CTAAGCTAAT TTAGCCACAT AATGTAGCAA TTAATGTCCTACTGGCACTG TACTTGATGA TGGAGTGACA CTTGTTTTTA ATACATCAGC CACATTATGTGTTAAATGCA GACCTAACTT TTACTATAAT GGTGGTTCTC CTTAAGGTGA AGCTCCTGGCGTTTAAGTTT TTGCTGCTGG TGCTGCCGCT GCAGGTGTTG CTGCCGTTAC TAGTTAATGT GTACCTTGCC AAATAAACAA AAACGATTCT CCTGCCACTG CAGGTGCCTA AGCTAATTTAGCCACATAAT GCAGTACTTA ATGTCCAACT GGCACTGCAA TTCAAGACGG AGTGACACTTGTTTTTAGTA ATTCATCCAC ATAATGTTCT TAATGCATTG CTAATTACTT TTTTAATGGTAATTTCGAAG CAGGTAAAAG TTAATGTTTA AAGTGTCCAG TAAGTAAAAC TACTCCAGCACATGCTCCAG GTAATACTGC TACTTAAGCC ACATAATGTT TGACCACATG TCCTGCTGGTACAGTACTTG ATGATGGAAC ATCAACTAAT TTTGTAGCTT CCGCAACTGA ATGTACTAAATGTTCTGCTG GCTTTTTTGC ATCAAAAACA ACTGGTTTTA CAGCAGGTAC TGATACATGTACTGAATGTA CTAAAAAATT AACTTCTGGT GCCACAGCTA AAGTATATGC TGAAGCTACTCAAAAAGTAT AATGCGCCTC CACTACTTTCGCTAAATTTT TATCGATTTC CTTATTATTTATTTCTTTCT ATTTATTGTGA(ORF)TGAATAAAA TAATTCATAT TATTTTATTT TTTTATTTTATGTTTATAAA TTAAAAAATA GATAAAATTT AAAATATATT AAAAATAATT TTTTATATAAATTATCAATT AACAACTAAC TAACAAAATA CAATTAAAAT CTTTATAGAA GGTTTTTCTTTATAATATTT TAAGGATTAA TTTACAAATT TTAATTAAAG TAACATTTTA TCATTTAAAATCTTATTAAA ATAAATACAT AAATTCTAGT TGATTCTTTT TTAATATTAA TTTAAAATTAGAATAAAAAA ATATGTTTTA AGTAAATAAA AGAAGAAATT TAATTTAATT TATTTATATTTAATTTAATA TTTATTTAAT TTATTTTCGA ATATTTATTT ATCAAACTTT TAAAACTAAAAATTTATTAA GTCTAATTTA AACTATATAT ATTATATTAT TTTGTATTCT TTTTTTTATTCATAATCATA AATACAGAAT TTTTTATATT TTGAGTTGTG CATATTATTT TATGAATGTTATCACTTATA TATGCGTATG TAATTTATTG TATCTCATTC AGGGCTTAAG CTTGTAAAATAATAATATTC AATATATTTG TTAAGGGAAA GGTTAGGCAA ACTAAACTAA ATTTTTTAACAAAAATATAT CAATTACAAA AATATTTATT TATAAATGAA TGAATAAAAA TAGTATTTTTATTTATTTAT AACACTAAAA GAATTC
我现在的疑惑是:究竟该从哪里开始设计引物比较好?请多指教
菜鸟问题,大家别笑
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