PCR中关于cDNA的一点疑问

反复冻融导致模板降解了，经常要用分一点放四度留着用，剩下的按要求放负二十。一般蛋白酶、引物、核酸都是不能反复冻融的。

是cDNA降解了，天天反复冻融，再结实的东西都不行，你以后还是分装用吧，冻融个3-4，就别再用了

DNA反复冻融的问题吧，反复冻融会破坏DNA双链结构，后面自然就会p不出来

cDNA一般很少出问题，除非反复冻融次数太多，

条带越来越淡有没有可能是你的酶出现问题了？酶反复使用过程中没有注意低温操作也容易成问题

会不会是你反复冻融的问题。

核酸最忌讳反复冻融，反复冻融会发生降解的，要么分装冻存，要么一直放4℃，在4℃可以放置半年没有问题，甚至更长时间

cDNA之制备后最好赶快用掉，在-20冰箱存放一般不要超过一个月，引物反复冻融或存放时间太长也会出现问题，建议你用此模板，使用其他的引物如18sRNA看看能否扩出条带，如果不行，那就是模板不行，如果可以那就换引物，当然还有可能是你的酶出问题了，换个酶试试，想知道结果就一步步排查，做几个重复，把酶，缓冲液，模板，引物，PCR水都换一遍，每个重复只换其中一个，然后在同样的反应程序，同样反应体系进行扩增，就可以找出问题之所在