细胞培养需要注意哪些细节？

在细胞培养过程中，除了细胞本身的生长特性，环境也会影响细胞的状态。1：细胞生长的附着物或支持物性质（如：细胞培养瓶/板或细胞培养载体）；2：细胞培养基的理化性质和成分；3：气相成分；4：培养温度等。合适的培养环境才可以使细胞表现出特定的功能。

培养液、血清的品牌尽量固定，操作过程中注意别污染，按时传代，如果是贴壁细胞使用胰酶消化时间别过长。

1.注意规范操作 2，要有无菌观念 3，养着细胞，至少要每天看一次。

第一、从液氮罐中拿出冻存管时要做好防护工作，特别是避免液氮溅到眼睛里，有条件的实验室可以配备防冻手套和护目镜；

第二、取出的冻存管要先确认管内没有液氮，再放入37度水浴锅，有液氮的情况下很容易因为管内压强突然增大而导致冻存管炸裂，轻则细胞无法使用，重则伤及实验人员；

第三、融化过程中要不断轻轻摇晃冻存管，使其尽快融化，但摇晃程度要把握得当，不能让水浴锅中的水渗进冻存管中；

第四、离心的具体转速和时间视细胞而定，通常难养的细胞需要降低转速，缩短时间，以减少离心对细胞的伤害；

第五、部分对离心敏感的细胞（主要是原代细胞）可以采用融化后不离心，直接重悬后补足培养基培养，待其贴壁后再换液去掉冻存液中DMSO的方式处理；

第六、如果冻存细胞量不多，可以在冻存管盖上标注离心方向，以便确定离心后细胞团位置，吸去上清时调整冻存管角度，使细胞团位于最下方，可以尽量减少细胞损失。

细胞培养需注意：

（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热；

（2）用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；

（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；

（4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小；

（5）严格的无菌操作；

（6）贴壁细胞消化适度：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化；

（7）传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作，每种细胞使用一套器材。避免交叉感染；

（8）传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。