丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

RT-PCR在RNA干扰中是否还有作用?

相关实验:实时定量 PCR 实验

user-title

丁香实验

请问各位:RT-PCR在RNAi效果的检测中是否还有作用。假设RNAi的效率达到50%,即有一半的RNA被降解掉,那么RT后,实验组、空白组的cDNA含量就相差了一倍,仅仅一倍的差异通过PCR能够反映出来吗?请高手指教。
wx-share
分享

3 个回答

user-title

zhuqueleee

有帮助
我觉得你的方法有点问题的。你不应该仅仅通过观察RNAi前后实验组、空白组的cDNA含量变化来监测RNAi效果,而是应当把空白组和实验组再各设一个看家基因对照,通过看家基因和目的基因的量的对比,从而观察你的RNAi效果。 个人意见,希望对你的实验有所帮助。
user-title

zhuqueleee

有帮助
像我们用b-actin做内参,一起PCR的时候目的基因跑30个循环,b-actin可以只跑20-23个循环即取出。当然各个基因不一样,具体问题具体分析。
user-title

smile51730

有帮助
RNAi效率可以通过RNA和蛋白水平检测,而RNA水平的检测普遍的是通过RT-PCR方法。但RT-PCR是半定量的,所以可能不会很好的反应出你的干扰效率。你可以用RT-PCR试试,假如有条件,建议你用real time PCR。
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序