血浆提取RNA用于跑QPCR跑不出的原因？

各位大大好！我最近在做人体血浆中提取RNA，用的是师姐之前用的试剂盒提的miRNA，我问过试剂盒的技术也可以用来提lncRNA，师姐的经验是OD大于1.3以上都是可用的，我实验刚开始时用的血浆提取RNA（新手刚开始做，浓度只有10+ng/ul）逆转录以后跑QPCR可以跑出来，大约试了5/6个样品，还摸索了QPCR体系加1ul 1.5ul 2ul CDNA不同体系的CT值，感觉没有太大差异，内参GAPDH在31/32左右。于是开始提实验组与对照组的血浆RNA继续跑QPCR，提出的RNA浓度在10~80ng/ul不等，260/280在1.4~2.0之间，感觉比摸索条件的时候提取的RNA要好一点，但是内参总是undetermined，目的基因也是时有时无，比内参情况好一点点，但是CT值也很大36/37甚至以上，基本没法看，把QPCR的产物跑胶，发现确实undetermined的孔跑不出东西，有CT值的孔能跑出单一条带，觉得QPCR环节没有问题，然后也跑了一次RNA胶想看一下RNA的完整性，但是发现跑不出来，即便是Q出来的样本也跑不出RNA胶，可能是含量太低了，引物也绝对没有问题，因为之前在细胞RNA环节都是使用的这种引物，最后始终找不到原因，想来园里寻求一下大家的帮助！有没有遇到类似问题的大大们！或者我的环节中还有问题？