PT-PCR 两步法中为什么跑不出来曲线？

隋美娇

2014-07-04

总RNA提取后，测试了浓度2640.32ng/ul 1.89ratio. 用CDNA合成试剂盒合成CDNA后跑PCR, PCR程序 50℃,2min 95℃ 10min (95℃ 15S 60℃ 60S 40个循环）为什么始终跑不出来扩增曲线? 求大家指导我已经尝试了不同的CDNA合成过程，用内参基因 B-action跑PCR，始终是一平的直线，好无助啊，求解？

1 个回答

sean18

2014-08-21

有帮助

首先，应该是RT-PCR，不是PT-PCR。RT-PCR就4个基本因素模板、引物、PCR试剂及PCR条件。曲线一直都是平的，一点都没有，非常可能的一点是你的realtime PCR仪设置出问题了，滤片模式选择错误。