求助！同源重组构建质粒连不上，求助各位大佬帮忙分析改进一下！！！

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2024-11-11

载体片段10000bp，目的基因片段2058bp，使用了诺唯赞的同源重组酶C112，无论各种比例各种条件都试了，均没有单菌落，偶尔有长单菌落，菌p显示假阳性无条带。能确定载体酶切肯定是切开了。

考虑是否基因太长不好连接，将目的基因进行分段连接，用了诺唯赞C117，还是连接不上。

后来分析了目的基因的结构域，p了一段138bp的片段，还是连不上。

现在已经不知道如何改进条件了，有没有大佬可以帮忙看看是怎么回事，万分感谢！！！！

夏洛克莫里亚蒂

2024-12-13

有帮助

换个感受态试试？我之前构10k以上的质粒用DH5α都没出来，换了stbl2就出来了。

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