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pcr扩增问题有很多问题?

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未来L04X

  1. 每三个是一对引物,上面是6对引物,没有一对是跑出来的,都是什么问题啊,做过一次了,和之前结果差不多,在之前的问题上改进了反应体系(引物增加)还有反应程序啥的,还能怎么改进吗,反应程序变性15s,退火20s,延伸1min
  2. 是常规的pcr扩增,反应体系有DNA模板,上下游引物,dd水,mix


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4 个回答

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高山云初

有帮助

要提高退火温度,其次延伸时间也得长些

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周末也要努力呀

有帮助

可能酶降解了样本,换取无酶水加样。

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开水白菜zjl

有帮助
  1. 首先你要搞清楚这些条带中有无你的目的条带
  2. 如果有目的条带,出现了非特异性扩增,则需要提高退火温度,退火温度可通过梯度pcr来优化
  3. 如果没有出现目的条带,则应考虑反应体系的问题,如模板浓度、引物问题等
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土井挞克树

有帮助

退火时间长一些,延伸时间也长一些

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