GST pull-down实验中，阴性对照GST蛋白怎么获得

GST融合蛋白纯化磁珠，通过磁珠偶联谷胱甘肽(GSH)，利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶之间酶和底物的特异性作用力，分离出带有GST标签的蛋白

在GST pull-down实验中，GST（谷胱甘肽S-转移酶）蛋白通常用作阳性对照，以验证GST-tagged蛋白与目标蛋白的相互作用。对于阴性对照，您可以使用未标记的GST蛋白。

未标记的GST蛋白可以通过重组表达和纯化来获得。这通常涉及将GST基因插入适当的表达载体中，如pGEX系列质粒，在宿主细胞中表达GST蛋白，然后利用亲和层析等纯化技术纯化蛋白。最终得到的未标记GST蛋白可以作为阴性对照使用。

在实验中，使用未标记的GST蛋白作为阴性对照时，预期不会与目标蛋白发生特异性结合，因为未标记的GST蛋白没有与目标蛋白相互作用所需的结构域或序列。

请注意，在设计和解释GST pull-down实验时，阴性对照的选择非常重要。确保选择一个与目标蛋白没有相互作用的适当对照蛋白，以评估实验结果的特异性和可靠性。

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