GST pull-down 对照试验如何设计？

一般对照都是采用gst成分保留在融合蛋白上，然后用gst结合在谷胱甘肽琼脂糖作为对照实验

做SDS-PAGE时点一个input的蛋白（即B-6＊His）阳性对照，看一下Western操作过程中试剂、操作步骤有没有问题

谷胱甘肽琼脂珠上只固定GST蛋白，inputB-6＊His，用于做阴性对照，看一下是否GST会与input的蛋白相互作用

下面是进行GST pull-down对照试验的一般设计步骤：

1. 准备GST融合蛋白：将目标蛋白的编码序列克隆到GST融合表达载体中，然后转染到适当的宿主细胞中进行表达和纯化。这将产生GST融合蛋白，其中GST标签用于后续的亲和纯化。

2. 准备负对照蛋白：选择一个与目标蛋白无已知相互作用的蛋白作为负对照蛋白。可以使用无关蛋白、空载体或已知不与目标蛋白相互作用的蛋白作为负对照。

3. 制备细胞裂解液：分别表达目标蛋白和负对照蛋白的细胞在适当的缓冲液中裂解，并加入蛋白酶抑制剂以避免蛋白降解。

4. 亲和纯化：将细胞裂解液通过亲和层析柱（如GST亲和柱）进行纯化，其中GST融合蛋白能够结合到亲和柱上。

5. 免疫印迹分析：将纯化后的GST融合蛋白和负对照蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳分离，然后转移到膜上。使用适当的抗体探针（例如抗GST抗体）进行免疫印迹分析，以检测目标蛋白和负对照蛋白的存在。

6. 结果解读：如果目标蛋白与GST融合蛋白结合，可以观察到目标蛋白在免疫印迹上的信号。负对照蛋白不应该显示与GST融合蛋白的结合。