求助，plko.1酶切条带很奇怪

以下是一些可能的解释：

酶切位点：请确保BshT1和EcoR1的酶切位点是正确的。如果酶切位点存在问题，可能导致不完整的酶切或完全没有酶切。您可以查看质粒的序列，或使用其他方法（如限制性内切酶消化或测序）来验证酶切位点是否正确。

酶切反应条件：请确保使用的酶切反应缓冲液、酶的浓度和反应时间都是正确的。有时候，过高或过低的浓度、反应时间不足或过长，可能导致不完全的酶切或者不正确的酶切。

质粒问题：即使来自不同的菌液，质粒也可能存在变异或不正确的构建。如果这些质粒存在问题，可能会影响您的酶切结果。

DNA片段太小：如果您的DNA片段太小，可能难以在电泳中看到正确的条带。您可以尝试使用聚丙烯酰胺凝胶（PA gel）或聚丙烯酰胺凝胶梯度凝胶（PAGE）进行电泳分离。

转化问题：转化后未检测到您所期望的DNA序列可能是由于转化效率不高，或者您的DNA不稳定，损失了在过程中。您可以尝试使用其他方法（如电转化或者化学转化）来提高转化效率，或者使用其他方法（如PCR）检测您的DNA样品是否稳定。

还是酶的问题，酶没有把最后一个化学键切开，建议重新确定化学键序列然后选择合适的酶