不将就啦啦啦
大佬们帮帮忙,就是我现在想构一个稳转载体,先切一个我们实验室有的载体,把上面基因和标签切掉,留下super启动子,然后把我基因和3×FLAG分别扩增连在一起,再和载体连接,但是我们组师兄建议我把3×FLAG当作上下游引物然后退火得到双链,再把得到的产物和我扩增出来的基因1:1作为模板扩增出来,但是现在就是基因和3×FLAG老是连不上,梯度pcr和overlap pcr我都试过了,就是连不上,有谁能帮帮我啊,我的基因是直接和3×FLAG连在一起的,中间没有其他东西,这会有影响嘛
毛利小五郎的徒弟
可以利用质粒进行连接,或者更换引物