求助/质粒转化后挑单克隆送检测序无信号，什么原因？

天空收藏家

2022-09-02

求助/质粒转化后挑单克隆送检测序无信号，什么原因？

您好！我是科研萌新，最近做实验遇到的问题就是通过氨苄抗性板子筛选的菌落经过挑菌，摇菌，送检后发现无信号。感受态是DH5α，质粒上有amp+的抗性基因，请问这是什么原因呀，我目前所知可能是传代次数太多导致质粒丢失，或者杂菌污染，会不会是因为amp+培养基的浓度过低，导致筛选效率低下？请您指点。明明在氨苄的板子上已经长出单菌落了，挑出来摇菌也明显浑浊了，为什么送检没有信号呢！?

3 个回答

balalaLy

2022-09-02

有帮助

这种情况蛮常见的，可能就是长的杂菌。又或者挑单克隆后摇菌时间不够，或者送测序前的菌活性就不行。我试过第一次送测序没有信号，同一管菌液第二次送测序结果对的

bamboopiggy

2022-09-02

有帮助

可能是你的质粒没有转进去，你最好拿感受态里的送的那个质粒做一下阳性对照，看长克隆能长多少。

汤姆卜丽波

2022-09-02

有帮助

送检无信号有可能是你挑到的就是杂菌，不是你自己的目标菌落