天空收藏家
求助/质粒转化后挑单克隆送检测序无信号,什么原因?
您好!我是科研萌新,最近做实验遇到的问题就是通过氨苄抗性板子筛选的菌落经过挑菌,摇菌,送检后发现无信号。感受态是DH5α,质粒上有amp+的抗性基因,请问这是什么原因呀,我目前所知可能是传代次数太多导致质粒丢失,或者杂菌污染,会不会是因为amp+培养基的浓度过低,导致筛选效率低下?请您指点。明明在氨苄的板子上已经长出单菌落了,挑出来摇菌也明显浑浊了,为什么送检没有信号呢!?
balalaLy
这种情况蛮常见的,可能就是长的杂菌。又或者挑单克隆后摇菌时间不够,或者送测序前的菌活性就不行。我试过第一次送测序没有信号,同一管菌液第二次送测序结果对的
bamboopiggy
可能是你的质粒没有转进去,你最好拿感受态里的送的那个质粒做一下阳性对照,看长克隆能长多少。
汤姆卜丽波
送检无信号有可能是你挑到的就是杂菌,不是你自己的目标菌落