极容易出现非特异性扩增的序列该怎么进行测序呢？
dxy_n4jex0k8
首先序列长度2000左右，很容易出现非特扩增，用低mg体系extaq，热启动酶和高保真酶可以跑出条带如图1。
然后切胶回收，连入t载体，筛选阳性克隆后做菌落pcr。发现用特异性引物跑的也都是非特异性扩增如图二。
继续选择单向测通，测出来大部分也是质粒序列。不知道该怎么办呢？
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3 个回答
bamboopiggy
有帮助
你试试提高一下annealing temperature的温度，然后胶回收后，测浓度，再做TA克隆
Topmicro
有帮助
你的引物是不是有问题？可以重新设计一对。
whilt-shirt
有帮助
这种情况可能要重新设计引物序列
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