极容易出现非特异性扩增的序列该怎么进行测序呢？

首先序列长度2000左右，很容易出现非特扩增，用低mg体系extaq，热启动酶和高保真酶可以跑出条带如图1。

然后切胶回收，连入t载体，筛选阳性克隆后做菌落pcr。发现用特异性引物跑的也都是非特异性扩增如图二。

继续选择单向测通，测出来大部分也是质粒序列。不知道该怎么办呢？