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蛋白点晶应该如何选择纯化标签

相关实验:用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

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棋NKKP

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2 个回答

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Eason老歌迷

有帮助

常用的标签有6×His标签、MBP标签、GST标签、SUMO标签等。这些标签各具特色,在选择标签时,需要先了解目的蛋白和标签的特点。

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天一湖医者

有帮助

1. 首先需要确定融合标签的目的,蛋白纯化首选His-Tag,Western blot首选Flag-Tag,免疫共沉淀可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc,活细胞成像则应该选择荧光蛋白等。

2. 考虑融合蛋白的影响:任何一类标签位于氨基酸序列的任一位置,都有影响目的蛋白表达或其功能的可能。标签可能会干扰蛋白的正确折叠,或中断亚细胞的定位信号,因此需要考虑添加的标签是否对目的蛋白的表达有影响。

3. 确定具体是标记在N-端还是C-端:根据蛋白结构、定位的特性选择标签蛋白标记的具体位置,若没有确切的蛋白结构,则可以都进行尝试,并选择更有效的标记。

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