蛋白表达不出来

dxy_z5a5ngg5

2022-06-22

去年十二月找公司合了质粒并转了BL21甘油菌，iptg诱导表达很成功，但是从今年五月开始，同样的步骤跑胶发现目的蛋白不表达了，挑平板活化后诱导也是，求大佬帮忙分析指导一下，万分感谢！！

bamboopiggy

2022-06-22

有帮助

先提一下质粒送测序，确定你的质粒还在

天一湖医者

2022-06-22

有帮助

1.质粒是否成功转化到你的宿主菌。

2.改变诱导时机和诱导剂浓度,一般当OD值在0.5-0.6时较好。

3.也许蛋白已经表达,只是不是已可溶形式表达的。

4.也许是蛋白表达过低,SDS-PAGE不能发现。

balalaLy

2022-06-22

有帮助

菌体的状态和诱导剂都会有关系，不同批次的诱导剂有时效果会差很多

府宅

2022-06-22

有帮助

可能是有杂菌污染，导致蛋白表达不出

dxy_gwrp7ndq

2022-06-22

有帮助

可能是高浓度IPTG会抑制蛋白表达，会生成包涵体