重组质粒，阳性克隆跑出来有目的条带（图1），提质粒双酶切后只有一条带，而且和原始质粒条带所在位置差不多。
wewe白
重组质粒，阳性克隆跑出来有目的条带（图1），提质粒双酶切后只有一条带，而且和原始质粒条带所在位置差不多（图2）。这是重组失败吗？每次载体双酶切之后也只有一条带，只是比原始质粒暗一点，没有看到200bp小的条带，是不是酶切失败了呢？
注：载体4000bp（载体双酶切去除200bp），插入序列800bp。
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3 个回答
bamboopiggy
有帮助
1.同时做个单酶切看看，条带位置是否高一些，2，用载体的引物做pcr，排除假阳性
汤姆卜丽波
有帮助
看到你验证的原始质粒和重组质粒大小也差不多，我感觉是没连上，假阳性
balalaLy
有帮助
不一定能看到两条条带，200bp跟4000bp相差太大，曝光不出来。直接送测序最简单快捷
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