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重组质粒,阳性克隆跑出来有目的条带(图1),提质粒双酶切后只有一条带,而且和原始质粒条带所在位置差不多。

相关实验:重组质粒的连接、转化及筛选

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wewe白

重组质粒,阳性克隆跑出来有目的条带(图1),提质粒双酶切后只有一条带,而且和原始质粒条带所在位置差不多(图2)。这是重组失败吗?每次载体双酶切之后也只有一条带,只是比原始质粒暗一点,没有看到200bp小的条带,是不是酶切失败了呢?

注:载体4000bp(载体双酶切去除200bp),插入序列800bp。

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3 个回答

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bamboopiggy

有帮助

1.同时做个单酶切看看,条带位置是否高一些,2,用载体的引物做pcr,排除假阳性

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汤姆卜丽波

有帮助

看到你验证的原始质粒和重组质粒大小也差不多,我感觉是没连上,假阳性

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balalaLy

有帮助

不一定能看到两条条带,200bp跟4000bp相差太大,曝光不出来。直接送测序最简单快捷

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