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你的去蛋白液和漂洗液中是否忘记入无水乙醇?或者是你组织液氮研磨不充分?
天一湖医者
原因:(1)裂解不充分; (2)微球分散性不好; (3)微球吸附能力太强。解决办法:(1)优化试剂裂解液配方; (2)筛选合适粒径及表面的磁珠;(3)磁珠表面钝化处理。
未来9
1、提高裂解液品质:对于提取胞内核酸的应用,我们需要对细胞进行裂解,释放核酸;当裂解不充分时,释放的核酸有限,即使磁珠的吸附能力再强,也很难获得较高的得率。一般可以通过提高表面活性剂浓度,来增强裂解液的裂解能力,表面活性剂能够破坏蛋白的结构,促进膜蛋白的变性,使得细胞膜破裂而充分释放出核酸。
2、洗脱要充分:洗脱不充分有时候我们裂解结合液各种条件优化到了极致,可是核酸得率仍然很低。这种情况有可能是磁珠结合了核酸,但是由于洗脱不充分,磁珠结合的核酸没有被洗脱下来。一般来说0.5mg的磁珠,洗脱液的体积为70-100ul。