求各位大神解答？我的质粒浓度240纳克每微升，酶切后线性化载体条带就很弱 ，目的条带200bp直接看不到，这怎么解决呢？

为什么要切这个？连之前不用看小的，大的切完全就行了。连之后筛选阳的直接测序啊

条带太弱，是底物浓度太低，或酶的浓度太大，或反应时间太长。。。调整一下比例就好了。

你浓缩一下质粒浓度应该就可以了

你看一下自己用的内切酶有没有过期，看看体系配没配对？或者质粒存放不当降解都有可能

用的什么试剂盒提取呢，质粒浓度是不是含有基因组的浓度，不是真实的吧

酶切鉴定一般一个反应切1ug质粒就够了，严格按照内切酶说明书操作，不要切过久，注意buffer有没用错。

这个浓度可以啊，你用的什么载体？什么酶？是双酶切还是单酶切？切了多久？酶切了多少ng的质粒？跑胶的浓度是多少？如果双酶切的话，你试试把两个酶分别切一下，看看能切成线性不，如果能切成，说明酶没有问题，然后你对比一下双酶切和单酶切的条带位置，如果位置有差异，说明你切开了。至于目的条带，不行，你还是pcr 一下，那样产量多。

可能是酶切过程中DNA降解了，如果是双切下来的片段很淡，可以看看切了多大的一段，太小的话容易弥散，或者没切开。