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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
低温条件下,nadh验证酶活时,340nm的nadh吸光值先下降再上升是为什么?
天一湖医者
在波长为340nm处随着NADH的氧化, NADH吸光度下降。
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问
请问做冰冻切片荧光染色,抗原修复还有必要吗?如果用的话,都用什么方法进行修复呢?
balalaLy
冰冻切片不存在这个问题,不需要抗原修复,石蜡切片的才要,用Edta或柠檬酸钠
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问
请问冰冻切片染色前是否再次用4%PFA再次固定?对结果的影响大不大?
balalaLy
我一般都是切片前新鲜组织固定,切好片后不固定,直接室温放置1小时左右过一遍pbs开始染色步骤
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问
PAGE上样量需要多少才能看到条带,我纯化蛋白上样,脱色之后什么也看不到,请问是怎么回事?
bamboopiggy
蛋白浓度在20-40ug之间,可以看到条带的,如果你看不到条带,可能是你的蛋白表达有问题
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问
细胞周期PI 染色和双染法有什么差异
balalaLy
双染是指PI和annexinV双染吧,它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的。Annexin Ⅴ(膜联蛋白 V)是一种分子量为35-36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合,将Annexin V 进行荧光素FITC标记,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。而碘化丙啶(P
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问
shrna质粒转染包病毒问题
balalaLy
大多数情况下辅助质粒是可以通用的,你可以问一下构建质粒的公司可不可以送点给你
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问
荧光素酶报告基因检测仪器
bamboopiggy
没法用荧光分光光度仪,只能用化学发光仪或者多功能酶标仪。如果实验室没有,去问问隔壁实验室或者你们学校的实验平台有没有。
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问
茎环结构miRNA逆转录,是混合逆转录好,还是单管逆转录好?
哇哈哈哈321
做miRNA荧光定量,应该是单管逆转录好。
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问
如何检测细胞内的NADH
bamboopiggy
有专门的检测试剂盒,国产的都有。
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问
🔥#话题探讨#:那些不得不说的「实验室生存法则」
dxy_h0v3cvu4
我们需要的以礼待人,礼貌、真诚的打招呼,以及恰当的介绍自己。切记不能给人以强势之感,或忽视之余。当把好的印象留给老师、师兄师姐时,可以说,你已经建立起良好的人设。但前提是,你真的是这样的懂礼貌,不做作的。积极主动的干一些并不是一些坏事情。比说说,打扫下环境卫生,帮他人干些活。有些人会觉得,师兄师姐没有叫我这么做,或许此时他/她们正在考验你。但是,你也需要记住,这不是一时的显摆,需要你真正地愿意。勤
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问
外泌体提取?提外泌体怎样才算的好?想请教大家一下。
府宅
WB检测可以发现样品中具有外泌体的标志物,可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情。NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征,了解其纯度
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问
蛋白纯化有活性无条带
bamboopiggy
你的酶活性太高了,可能蛋白浓度还不够wb检测的,那点点蛋白的酶活性就够了。
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问
脑立体定位注射如何确定深度
府宅
在翻到该核团所在的页面,多是冠状切面,核团的长度要看所占的页数(右下角有一个Bregma值,用第一页的这个数值减去最后一页的这个数值就是核团的长度)。根据这些数据估算核团的长度。核团的宽度、高度可直接由图上的坐标读出,即在各页面上挑选一个横截面最大的,在核团中心点一点,经这个点划水平线和垂直线,水平线和纵坐标的交点就是核团的深度坐标(颅骨下多少mm),垂直线和横坐标的交点就是核团左右坐标(中线旁开
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问
细胞转染后出现了很多小点点,是凋亡吗?
bamboopiggy
出现的黑点可能是细胞碎片,可以在收样的时候,用pbs洗掉
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问
谷氨酸棒杆菌电转,每个电击杯加多少质粒和菌液呢?
府宅
转化时一般200ul感受态细胞悬液 中加入的质粒含量不超过50ng,体积不超过10ul。将40~100ul解冻的感受态细胞转移电击杯
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问
外泌体研究
dxy_gwrp7ndq
可使用洗涤剂处理和超声波替代电穿孔方式
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问
biolegend的Fixation Buffer可否用于表面染色后的细胞保存?
bamboopiggy
paraformaldehyde 是多聚甲醛,如果你的biolegend的fixation buffer成分也是多聚甲醛,可以用的
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问
Pcrtargeting切除抗生素是电转进Bt340后在37度完成筛选吗?然后在42度过夜诱导吗
府宅
37度培养筛选,42度热击90秒
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问
ImageJ连续处理图片,每张图都需要Calibrate吗?
bamboopiggy
需要啊,因为每张图的底色可能都不一样
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问
植物CP蛋白的单抗感觉特异性不是很强,能跑出来很多带,请问这是正常现象吗,如何解决?
dxy_gwrp7ndq
如果实在没有更好的抗体,建议采用阴性对照和阳性对照来确定上述哪个条带是目的条带。
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