蛋白纯化有活性无条带

his标签的重组膜蛋白过镍柱纯化蛋白，上样流出液里有很高的酶活性，但是wb没条带或者条带很浅，之后的咪唑洗脱液里活性挺高，条带也挺深的。

有大佬碰到过这样的情况吗？上样流出液到底什么情况啊😳