镍柱纯化目标蛋白，杂蛋白分离不开

可以使用咪唑梯度洗脱，杂蛋白说明纯化有问题

Ni柱的缺点就是特异性其实不强，样品里加40mM咪唑可以改善。

可以提高杂蛋白与镍柱结合起始咪唑浓度，以降低杂蛋白与镍柱的亲和力

有可能是非特异性结合。你可以尝试优化蛋白洗脱方法，将你的目的蛋白与杂蛋白进行分离。