TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可 ...
microRNA（miRNA）是一种机体内源性表达的单链小分子RNA，位于基因组非编码区，本身不具有开放阅读框（open reading frame，ORF），具有高度保守性，时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中，不编码任何蛋白质，长度仅为20～24nt。成熟的miRNA 5′端有一个磷酸基团，3′端为羟基，由具有发夹状结构的约70～90nt的单链RNA前体经过Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA ...
实验很早之前做完了，总结一下银染。希望对后人有些帮助。银染技术很容易掌握，做好却需要注意一些小细节。希望我犯得这些小错误你能避开，节省宝贵的时间。本方法适当的修改了文献中的一些方法。文献在文章末已附上。——————————————华丽分割线——————————————————————————————————一、银染前准备1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。4. 跑胶时我采用大梳子 ...
要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c： ...
由于PCR版已经加分，本版不再加分。感谢支持！经过一段时间的RT-PCR实验，我的实验没有多大进展，但是提取RNA倒是有了一点体会，在这里写出来，与大家共同分享，希望对新手是个帮助，也希望各位战友能够批评指正，谢谢！RNA提取心得一 组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80°或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4°，注意不要拿到常温 ...
看到很多网友还在找这些相关的书籍，在这里再提供给大家。已测试可以下。文件名称: 现代分子生物学实验技术全套(第二版 卢圣栋主编) 文件格式： PDF文件大小: 55.09MBhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/11310519文件名称: 精编分子生物学实验指南 中译本 奥斯伯 文件格式： PDF文件大小: 20.22MBhttp://down.aybook.cn/book7/aybook.cn_xiandaishengwu1012.pdf文件名称: 分子 ...
The Knowledge Foundation: RNA in drug developmenthttp://www.knowledgefoundation.com/events/5071225_p.pdfA Link Between RNA Interference and Nonsense-Mediated Decay in C. eleganshttp://www-hhmi.genetics.utah.edu/bass/papers/science00.pdfRNAi in Cup ...
标题：【申请上传】Molecular Biology of the Gene (Watson J.D., et al., 5th edition, 2004)内容：Molecular Biology格式：PDF大小：110 MB语种：英文简介：http://www.pearsoned.co.uk/Bookshop/detail.asp?item=300126#Description位置：老赵一号航母核酸基因技术区/pub/Molecular Biology of the Gene--------------- ...
此资源转自小木虫，都可以下，相当清晰，但是需要安装米人，本人测试过了。希望好心的版主可以给点积分，谢谢了先对于刚进实验室的新手来说，有太多仪器不懂，有太多操作不了解，现在把浙大基因工程实验操作讲解视频分享给大家，希望能对实验室新手有帮助~1.细菌基因组DNA的提取.wmvhttp://d.namipan.com/d/ba51df852bf4755d02e6a74a8ef3e04000f112bd57a77f042.P ...
最近要写一篇关于RNAi的综述，昨天在nature上面找了一篇关于rnai全文的综述，觉得写的挺好，拿出来分享Nature(C) 2004 Nature Publishing Group----------------------------------------------Volume 431(7006) 16 September 2004 pp 338-342----------------------------------------------Revealing the world of RNA interferenceMello, Craig C.1 ...
1.原理和方法总则操作指南质粒的简单提取特殊类型质粒提取酵母质粒提取 基因疫苗质粒提取 双歧杆菌质粒提取 重组质粒的提取2.质粒的保存与运输质粒的保存低浓度质粒的保存滤纸上质粒的溶解3.试剂与试剂盒Promega的Wizard试剂盒Promega试剂盒效果谈4.经验之谈质粒提取的一点经验 提取失败请注意关于低拷贝质粒简便的质粒提取方法振荡的手法为什么会出现沉淀一篇关于质粒提取的好文章大提质粒经验谈5.质粒的酶切
RNA-isolation (TRIZOL method)Isolation of RNA from whole worms using TRIZOL reagent (Gibco-BRL).1) Wash worms from a 60 mm plate with 1 ml DEPC-treated water.2) Spin down worms at 4000xg in microfuge for 1 minute.3) Remove excess water and add 1 ml Trizol reagent. Vortex and invert tube. Let sit at room ter ...
shRNA 资源库及其构建方法shRNA资源库：以下资源库的构建及其详细的protocol都可以在网站下载1.NCBI shRNA资源库http://cgap.nci.nih.gov/RNAiAbout RNAi on CGAPThe NCI is part of the consortium supporting the preparation of human and mouse libraries containing RNAi constructs that target cancer-relev ...
我现在正在做的是AFLP方面的东西，结果检测必须要做变性胶电泳才能看到，但是前一阵子我做的一直不顺，条带少，我试着减少引物的筛选个数和降低退火温度结果还是这样，一时不知道从何处找原因，想求教你的是1、先看看我前两天做的变性胶电泳图片，条带太少，我看到的文献都是说条带在50到100的样子，为什么我跑的是这样子的呢，我做了减少引物的筛选碱基的个数和降低退火温度，结果还是差不多，请问各位做过AFLP的或者是跑变性聚 ...
以下是我翻译的脂质体说明书，请多指教————————————————————————————InvitrogenLipofectamineTM 2000Cat. No. 11668-027 Size: 0.75 mlCat. No. 11668-019 Size: 1.5 ml含量及保存：LipofectamineTM 2000 为液态，浓度为1mg/ml。储存在4℃，注意不能冻存。重要原则：进行转染时应遵循下面的原则：1．对大多数细胞来说，DNA(ug)与脂质体(ul)混合的比例应为1:2至1:3。例如 ...
本人整理了论坛上关于战友所求助的各种质粒载体的图谱，后面所跟着的网站都是含有前面名称载体的详细图谱，希望对大家能有帮助！质粒pGEM-4Z载体图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5198013_0.htmlpGEX-4T-2载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4211077_0.htmlpGEX-4T-1载体图谱：htt ...
我5月18号向一位韩国Han-Yang大学的教授索要两个基因的质粒。得住于我们园子里面很多贴子的帮助，在他们的帖子的帮助下，今天（6月2号）老外终于把质粒寄来了。前后仅仅半个月和老外的接触，让我深刻体会到国外专家教授的那种科学无私的精神。把与他来往通信贴出来，供以后需要的朋友参考。也宣传一下这位教授（Sang-Hun Lee MD.PhD）的科学无私精神。Sent: Sunday, May 18, 2008 12:34 PMDear Dr Lee,I am wor ...
对于刚开始做实验的人来说，收集资料比不可少，然而现在重复性资料很多很杂，要想在较短的时间内获得更过的信息，就必须找到高效的信息资源，我以下的内容也是从各种渠道收集来的资料，我把它们做了整理，截取了其中比较有价值的内容进行编排，希望你看过之后能对核酸杂交有个全面的认识，在做实验时少犯错误。核酸杂交（Nucleicacid hybridization），又称核酸分子杂交。原理：是核酸变性和复性理论。双链的核酸分子在某些理 ...
第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节 概 述 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所 ...
摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低产出，(3)生成 ...
