【原创】DNA银染经验总结【PAGE银染】

实验很早之前做完了，总结一下银染。希望对后人有些帮助。

银染技术很容易掌握，做好却需要注意一些小细节。希望我犯得这些小错误你能避开，节省宝贵的时间。

本方法适当的修改了文献中的一些方法。文献在文章末已附上。

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一、银染前准备

1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。

2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。

3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。

4. 跑胶时我采用大梳子，小样本量。因为银染本身分辨率就很高，样本量太大时杂带太浓。小梳子的条带比较模糊。如图



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二、银染过程

1. 电泳结束后，自来水冲洗玻璃板两面，预冷，剥下凝胶，双蒸水洗涤两次。

2. 浸没于0.1% 的AgNO3溶液中，摇床银染10分钟。

注意事项：

a. 时间。银染时间可延迟到15分钟，但是千万不要超过20分钟，否则胶的背景极深，一个字，丑。

b.浓度。硝酸银溶液浓度不宜超过0.15%，我的经验表明，AgNO3浓度越高，胶越黄越丑。

3. 双蒸水冲洗两次，1min。

注意事项：

a. 充分的漂洗可以降低背景色。因此漂洗时间一定要到1min

4. 浸没于1.2% NaOH+ 0.4% 甲醛溶液中显影，看到模糊的条带后立即大量双蒸水冲洗，中止显影。

注意事项：

a. 白色器皿，看条带比较方便。

b.出现淡淡条带后立即中止银染。千万不要等到看到清晰的目标条带时才中止显影，那时已经显影过度，拍片时背景色极深，丑。

c. 采用“低浓度NaOH×长时间显影”的策略。实验证明浓度较高的NaOH（浓度超过1.5%）很容易显影过度。因此不采用“高浓度NaOH×短时间显影”的策略。
（此图采用低浓度的氢氧化钠显影，即使显影过度，也不会出太大问题。）

d.为便于控制显影速度，得到最佳的信噪比，显影液温度不要过高（显影液提前半小时配，NaOH溶解后会释放热量，导致显影液温度过高），以10度左右为宜，温度过高则易显影过度，背景深；温度过低则显影时间延长。

e. 显影后尽早拍片。这是早晚的差别。

（此图为显影结束后，尽快拍的片子）分辨率较高，杂带少。

（此图为2分钟后拍的图片）胶片会随着时间逐渐变黄，条带越来越浓，最后杂带逐渐显现，因此拍品要趁早。时间拖得越久，片子越难看。

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在操作的过程中参考此文献中的银染方法，并作了一些改进。附上此文献，供大家参考。