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银染实验

相关实验:银染实验

最新修订时间:

材料与仪器

甲醇(50% 和5%v v) 二硫苏糖醇 AgNO3 柠檬酸(固态) 显影液

步骤

试剂

甲醇(50% 和5%v/v)

10umol/L二硫苏糖醇(DTT)

AgNO3(0.1%w/v)

柠檬酸(固态)

显影液

操作程序

此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓慢摇动,并进行下列步骤。

1)在50% 甲醇溶液中浸泡2次,每次15 min。

2)在5% 甲醇溶液中浸泡10 min。

3)用H2O迅速洗3次。

4)在10umol/L DTT溶液中浸泡20 min。

5)在0.1%AgNO3溶液中浸泡20min。

6)先用H20快速洗1次,然后用显影液洗2次,每次不超过15s。

7)在显影液中浸泡数分钟,直至显现蛋白质带。

8)加入固体柠檬酸(双水合物)(每200 ml显影液加约10 g柠檬酸),停止显影。

9)用铝箔盖住凝胶(使避光),继续浸泡10 min。

10)用H2O彻底清洗。凝胶在铝箔下(在暗处)H2O中浸泡10 min。再置(暗室)H20中过夜,使蛋白质条带显色。

如需要,凝胶可在4% 甘油中浸泡>lh,然后干燥。

来源:丁香实验

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