银染
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一、材料与试剂
1. 99.5%乙醇
2. 100%乙酸
3. 亚硫酸氢钠
4. 硝酸银
5. 甲醛溶液(37%)
6. 碳酸钠
7. 硫代硫酸钠
8. EDTA
二、配方
1. 固定液:30%乙醇1:10%乙酸(160 ml:50 ml:290 ml H2O)。
2. 30%乙醇。
3. 感光液:硫代硫酸钠25 mg/100 ml(通常现用现配)。
4. 染色液:0.2%AgNO3(需20%AgNO3母液400 ul/40 ml)。(注意,染色液是很强的氧化剂)+3 ul/40 ml甲醛溶液(36-38%,必须现用现配)。
5. 显影液:6%碳酸钠(3 g/50 ml),4 ug/ml 硫代硫酸钠(Na2S2O3,需4 mg/ml 母液50 ul,在冰箱中可保存几周)+甲醛溶液25 ul/50 ml,必须现用现配。
溶液中不要加入过多的甲醛,否则会产生过深的背景。使用新配的硫代硫酸钠溶液(4 mg/ml),可以得到更好的结果。
三、仪器设备
1. 摇床
四、实验步骤
1. 将胶在固定液中孵育过夜,或在摇床上慢摇2小时。
2. 在摇床上用30%乙醇洗涤胶,3×10 min。
3. 用纯水洗涤胶,2×10 min。
4. 将胶孵育在感光液中1分钟。
5. 用纯水洗涤胶,2×1 min。
6. 将胶孵育在染色液中25分钟。
7. 用纯水洗涤胶1 min。
8. 将胶在显影液中,摇床轻晃2~3分钟。
9. 在有条带出现后,加入终止液。