材料与仪器
蛋白质
脱色液 戊二醛 硝酸银 洗印显影液
培养箱 摇床
脱色液 戊二醛 硝酸银 洗印显影液
培养箱 摇床
步骤
1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。
2. 倾去固定液，加5倍凝胶体积的脱色液，缓慢摇动60 min 以上。
3. 倾去脱色液，加5倍凝胶体积的10%戊二醛，在通风橱中缓慢摇动30 min。
4. 倾去戊二醛溶液，用水洗凝胶4次以上，每次30 min 以上，最后一次洗涤以过夜为佳。缓慢摇动。
5. 倾去水，将凝胶置于约5倍凝胶体积的硝酸银溶液中平衡（完全盖没凝胶），剧烈振荡 15 min。
6. 将凝胶移至另一塑料盒，用去离子水洗5次，每次精确5 min，缓慢摇动。
7. 用500 ml 水稀释25 ml 显影液，将凝胶移至另一塑料盒，加入足够的稀释显影液盖没凝胶，并剧烈摇动至条带达到需要的强度。如果显影液变成棕色，须换新鲜的显影液。
7. 用500 ml 水稀释25 ml 显影液，将凝胶移至另一塑料盒，加入足够的稀释显影液盖没凝胶，并剧烈摇动至条带达到需要的强度。如果显影液变成棕色，须换新鲜的显影液。
8. 换快速定影液，定影5 min，必要时，用湿润了的棉花擦去凝胶表面沉积的残余银沉积物。顿去定影液，用水彻底冲洗凝胶。
9. 凝胶拍照，干胶或在可密封的塑料袋中保存。
9. 凝胶拍照，干胶或在可密封的塑料袋中保存。
注意事项
1. 带手套并仅在通风橱中进行。
2. 由于氨银溶液干燥后会发生爆炸，应马上用大量水冲去。
2. 由于氨银溶液干燥后会发生爆炸，应马上用大量水冲去。
来源：丁香实验
