材料与仪器
蛋白质
DTT 硝酸银 碳酸盐显影液 柠檬酸
摇床
DTT 硝酸银 碳酸盐显影液 柠檬酸
摇床
步骤
1. 将凝胶置于玻璃或聚乙烯容器中，加入100 ml 固定液，在旋转摇床中缓慢摇动30 min。
2. 倾去固定液，将凝胶浸没在脱色液中，缓慢摇动30 min。
3. 倾去脱色液，加50 ml 10%戊二醛，在通风橱中缓慢摇动10 min。
4. 倾去戊二醛，用水彻底洗凝胶2 h，期间换水几次以保证获得低本底水平。
5. 倾去水，以100 ml ug/ml 的DTT浸泡凝胶30 min。
5. 倾去水，以100 ml ug/ml 的DTT浸泡凝胶30 min。
6. 倾去DTT溶液，不用冲洗，直接加入100 ml 0.1%硝酸银溶液，缓慢摇动30 min。
7. 倾去硝酸银溶液，用小量水快速冼凝胶1次，然后用小量碳酸盐显影液快速洗2次。
8. 将凝胶浸泡在100 ml 碳酸盐显影液中缓慢摇动，直至获得所需的显色水平。
9. 每100 ml 碳酸盐显影液中加入2 ml 2.3mol/l 柠檬酸，并缓慢摇动10 min 以终止染色。
7. 倾去硝酸银溶液，用小量水快速冼凝胶1次，然后用小量碳酸盐显影液快速洗2次。
8. 将凝胶浸泡在100 ml 碳酸盐显影液中缓慢摇动，直至获得所需的显色水平。
9. 每100 ml 碳酸盐显影液中加入2 ml 2.3mol/l 柠檬酸，并缓慢摇动10 min 以终止染色。
10. 倾去液体，用水冼几次，缓慢摇动30 min。
11. 凝胶拍照，凝胶在0.03%碳酸钠中浸泡10 min，用塑料保鲜膜包裹或密封于可热密封的袋子中保存。
来源：丁香实验
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