材料与仪器
蛋白质
甲醛固定液 硫代硫酸钠 干胶液 甲醇
摇床 透析膜
甲醛固定液 硫代硫酸钠 干胶液 甲醇
摇床 透析膜
步骤
1. 将凝胶置于塑料容器中,加入50 ml 甲醛固定液,在旋转摇床中缓慢摇动10 min。
2. 倾去固定液,用水冼两次,每次5 min,缓慢摇动。
3. 倾去水,凝胶浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸钠溶液中1 min,缓慢摇动。
4. 倾去硫代硫酸钠溶液,用水洗凝胶两次,毎次20 s。
5. 倾去水,将凝胶浸泡在50 ml 硝酸银中10 min。缓慢摇动。
6. 倾去硝酸银溶液,用水洗胶,然后用小量体积的硫代硫酸盐显影液冼。
7. 将凝胶浸泡在50 ml 新配制的硫代琉酸盐显影液中,缓慢摇动,直至获得足够的条带显色强度,在下一步停影前继续显影一会儿,或显影到此为止。
8. 每100 ml 硫代硫酸盐显影液加入5 ml 2.3 mol/l 柠檬酸,缓慢摇动10 min。
9. 倾去液体,用水洗凝胶,缓慢摇动10 min。
10. 倾去水,将凝胶浸泡在50 ml 干胶液中10 min。
8. 每100 ml 硫代硫酸盐显影液加入5 ml 2.3 mol/l 柠檬酸,缓慢摇动10 min。
9. 倾去液体,用水洗凝胶,缓慢摇动10 min。
10. 倾去水,将凝胶浸泡在50 ml 干胶液中10 min。
11. 将凝胶放在两张湿润的透析膜之间,夹在玻璃平板中,平板的边缘用夹子夹好,在室温干燥过夜。
来源:丁香实验