原理
1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便且快捷,而银染法具有相当高的灵敏度,能用于检出更少量的蛋白质。
2. 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。
3. 考马斯亮蓝在酸性条件下为棕红色,其所含的疏水基团在酸性条件下雨蛋白质的疏水区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成蓝色的蛋白质染料复合物,在595nm处有最大吸光度,在一定的蛋白质浓度范围内,蛋白质染料复合物在595nm下的吸光度与蛋白质量成正比。
材料与仪器
聚丙烯酰胺凝胶 固定液 染色液 脱色液
滤纸 培养箱
步骤
3. 倾去染色液,用约50 ml 固定液冲洗凝胶。
5. 需要时,给凝胶拍照。
注意事项
1. 带手套并仅在通风橱中进行。
2. 由于氨银溶液干燥后会发生爆炸,应马上用大量水冲去。
3. 不可使用石英比色皿(染色不易洗掉) ,可用塑料或者玻璃比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇荡洗,以洗去染色。塑料比色皿决不可以用乙醇或丙酮长时间浸泡。
来源:丁香实验