自己做ChIP有一段时间了，将一些经验教训写上来，给自己作个总结，备个份。 重要的地方，可以决定结果的好坏 1、cross-link：甲醛浓度、胶联时间一般都使用1%formaldehyde，但也有人用浓度偏高的，比如：add 10 ml of Fresh PBS and add 270 ul of 37% formaldehyde, swirl gently to mix, and place at room temp 10 min.胶联时间很是关键：The duration of formaldehyde treatment is a ...
各位战友：一下是小妹在Invitrogen公司的siRNA designer设计的shRNA序列，均为小鼠基因，也经过Blast验证，质粒选择的是pGPU6/GFP/neo，酶切位点分别是Bbs 1 和BamH 1，请给位专家给予指导！Rictor（190-208、845-863）：1.5-CACCGCTGGGCCATCTGAATAAC-TTCAAGAGA-GTTATTCAGATGGCCCAGC-TTTTTTG-3 3-CGACCCGGT ...
说明：资料占有数和资料利用率成反比，是我们大多数人的一个坏习惯（包括偶自己）。近期论坛不少帖子都对实验室里的所用水感到困惑。我自己最大的一个体会是层析试验中缓冲液的配制，所用的水对离子交换层析和疏水层析的效果有所影响。为此， 特地摘抄一段大家都知道（但未仔细学习）的内容，以共同来温习实验室用水的相关常识。问题：实验室中常见规格的水及使用注意点?1、自来水（Tap water）Tap water is usually of uncontroll ...
看文献想到的。希望大家从实际出发，讨论不同方法的优缺点，注意的是这里的突变是广义的包括染色体的改变。建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】核酸版2005年9月份明星技术: ribosome display2. 【交流】核酸版2005年8月份明星 ...
【1】pSUPER vectorhttp://www.oligoengine.com/pSUPER_New/pSUPER_Main2.html【2】pSilencerhttp://www.ambion.com/catalog/ProdGrps.html?fkApp=25&fkSubApp=145【3】psiRNA VECTORhttp://www.invivogen.com/siRNA/psiRNA.htm【4】pGE-1http://www.s ...
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1713522&sty=3&keywords=pHluorin很久前，2004年的一个关于GFP的贴子。经过很多年的发展，荧光蛋白的发展超出想像。大致总结如下：1，普通的绿色荧光蛋白（GFP）；2，增强型的绿色荧光蛋白（EGFP）；Schmitt, M., et al., 2006. Use of PMA1 as a housekeeping biomarker for assessment of toxi ...
最近做DNA shuffling，本来去年做过，但这次做不知怎么搞的，片段用DNase I怎么也切不好，跑胶后什么也没有，请问哪位做过，交流一下protocol,我的片段1.2kb,想得到100bp的,谢谢建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】 ...
无意中看到,觉得不错,拿来与大家分享,内容包括:Useful resources:Blocking with immunizing peptide protocol (BL)Buffers and stock solutionsFluorophore tableTroubleshooting tipsImmunohistochemistry (IHC) / Immunocytochemistry (ICC) protocols:IHC-Fr staining protocolI ...
本期明星技术：allele-specific expression analysis/assay人类基因组计划的结构基因组测序完成后，留下了海量的序列信息。然而，这些序列有何功能，多数尚不得而知。在序列功能研究中，除了基因及其亚结构功能探讨外，还有一个重要的内容，那就是同一序列的多型性也可能具有不同的功能（或具有不同的功能强度）。特别是近来的研究已经肯定性地证明，很多位点同一位置因碱基不同而所致的多态或突变（如SNPs）， ...
首先要感谢DXY上的neohjh等几位热心的战友，没有他们的经验我不会这么快做出该实验引物设计与说明书中不一致，我是参考“An efficient one-step site-directed and site-saturation mutagenesis protocol”这篇文献设计的。Site-directed Mutagenesis Method1. Primer designThe primer design was according to “QuikChang ...
RNAi的实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effe ...
miRNA和siRNA的基本介绍及区别1998年，Andrew Fire和Craig Mello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，Amy Pasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RNAs(stRNAs，mall temporal RNAs)。RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断 ...
为了响应ftp资源讨论版不再处理站友的上传申请而由各专业讨论版的版主负责的举措，现做出以下说明：1.有关核酸基因技术的资源希望通过ftp共享，请在本版发新帖申请，一般有五人以上需要后即发给上传密码。是否加分鼓励，由本版的版主根据情况决定。对于不易界定专业的资源，以及部分比较难得的精品，仍然在ftp资源讨论版发帖申请。2.老赵一号ftp上实验技术专业组暂由lvzanlv协助版主管理。考虑到ftp的空间有限，所上传 ...
Let-7与肿瘤的关系，一个经典实例的完整再现，一次实战演习microRNAs完整解决方案暨国内首次生物美学技术培训班广州莱德尔生物科技有限公司与您相约2009年3月9日-2009年3月18日不容错过的理由：专业的品质，丰富的经验，莱德尔带您步入小分子的殿堂，与您分享microRNA研究最完整的解决方案。群雄逐鹿的战场上一块仅存的处女地，microRNA研究最后一次不容错过的良机：microRNA启动子的表 ...
如有遗漏之处，请跟进，谢谢！1 ProtocalRNA-isolation protocalhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=686034&sty=3&keywords=RNA%CC%E1%C8%A1抽提经验谈http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=596203&sty=3&keywords=%B3%E9%CC%E1%BA%CB%CB%E1RNA提取（网友总结 ...
几乎所有的siRNA都不可避免的产生off-target效应，好一点的也许只会off-target几个基因，差一点的甚至可以off-target几十个基因。关于off-target的机制，以前认为是siRNA的sense strand对于其他基因mRNA的干扰造成，对于这个效应，可以利用最新的化学修饰方法削弱sense strand与RISC的结合，同时增强anti-sense与RISC的结合力，按照这个原理虽然也可 ...
请问大家，用地高辛标记和用放射性标记做实验，各有什么优缺点？实验过程和实验试剂有什么特殊的要求，拜**答案。。。。做过的请介绍介绍失败的和成功的经验，大家分享，谢谢附文章一篇:原位杂交实验原理与方法一、目的本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。二、原理原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标 ...
基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体（molecular cloning vector），它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻，分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭，外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星，宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞，并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又 ...
最近要开展新的实验，对其中的Proteinase K 很感兴趣。对园子里的相关帖子进行里归纳整理，大家共同学习，进步。【求助】请问蛋白酶K买哪里的好？http://www.dxy.cn/bbs/thread/6533303请教：蛋白酶K配方http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/862901_1.html在线求助： 蛋白酶K 的配置http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...
进行中的核转录分析nuclear run on transcription assay在细胞和提取物中加入放射性核素标记的核苷三磷酸，使其掺入到正在转录的mRNA分子中。通过核酸分子杂交的方法，即可以同时鉴定出多种不同基因是否转录以及其转录的量。该方法作为一种比较可靠的测定转录活性的方法，排除了northern blot等方法中mRNA的半衰期对实验结果的影响，可同时分析多种基因的转录活性。The idea of this assay is to i ...
