【交流】核酸版2005年6月份明星技术: nuclear run on transcription
丁香园论坛
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进行中的核转录分析nuclear run on transcription assay
在细胞和提取物中加入放射性核素标记的核苷三磷酸，使其掺入到正在转录的mRNA分子中。通过核酸分子杂交的方法，即可以同时鉴定出多种不同基因是否转录以及其转录的量。该方法作为一种比较可靠的测定转录活性的方法，排除了northern blot等方法中mRNA的半衰期对实验结果的影响，可同时分析多种基因的转录活性。
The idea of this assay is to isolate nuclei from cells, then allow them to extend in vitro the transcripts they had already started in vivo. This continuing transcription in isolated nuclei is called nuclear run on transcription because the RNA polymerase that has already initiated transcritopn in vivo simply "run on", or continues to elongate the same RNA chains. The run on reaction is usually performed in the presence of labeled nucleotides so the products will be labeled. Since initiation of new RNA chains in isolated nuclei does not occur generally, we can be fairly confident that any transcription we observe in isolated nuclei is simply a continuation of transcription that was already occuring in vivo. Therefore, the transcripts obtained in a run on reaction should tell us which genes are transcribed in vivo. If we are concerned about the possibility of initiation of new RNA chains in vitro, we can added heparin, an anionic polycharide that binds to any free RNA polymerase and prevents re-initiation.
加分原则：
1. 你可以在此跟帖提问。如果你的问题有一定深度，引发战友们积极讨论和思考。加1-2分。
2. 回答问题或介绍经验。可加1-2分。
3. 精品论文导读（Cell,Nature,Science,Nature Genetics,PNAS等杂志上的更易加分），可加1-3分，即给出全文链接，且深入浅出介绍文章的主要内容加1分；且对文章的实验设计、结果和本文可能开展后续工作的介绍加2分；同时用流线图画出文章的技术路线、思路或结构的加3分。
站友们在发知识性的帖子时，请注意标明“原创”或“转帖（及其来源）”。因为原创加分力度会大一点。多谢合作！
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1. 【交流】核酸版2005年5月份明星技术: Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript: SMART
2. 【交流】核酸版2005年4月份明星技术： Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA
3. 【交流】核酸版2005年3月份明星技术：Chromatin immunoprecitation,ChIP
4. 【交流】核酸版2005年02月份明星技术：SELEX技术
5. 【交流】核酸版2005年元月份明星技术：Ribonuclease protection assay，RPA
6. 【交流】核酸版2004年12月份明星技术：Serial Analysis of Gene Expression，SAGE
7. 【交流】核酸版2004年10月份明星技术：DNA Microarray
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The idea of this assay is to isolate nuclei from cells, then allow them to extend in vitro the transcripts they had already started in vivo. This continuing transcription in isolated nuclei is called nuclear run on transcription because the RNA polymerase that has already initiated transcritopn in vivo simply "run on", or continues to elongate the same RNA chains. The run on reaction is usually performed in the presence of labeled nucleotides so the products will be labeled. Since initiation of new RNA chains in isolated nuclei does not occur generally, we can be fairly confident that any transcription we observe in isolated nuclei is simply a continuation of transcription that was already occuring in vivo. Therefore, the transcripts obtained in a run on reaction should tell us which genes are transcribed in vivo. If we are concerned about the possibility of initiation of new RNA chains in vitro, we can added heparin, an anionic polycharide that binds to any free RNA polymerase and prevents re-initiation.
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