【交流】核酸版2005年9月份明星技术: ribosome display
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本期明星技术:核糖体展示 (ribosome display)
ribosome display技术的核心是利用体外核糖体表达载体构建 sc Fv抗体库 ,并于体外转录为 m RNA,体外翻译表达 ,随后以固相化的抗原分子亲和筛选出核糖体 -m RNA-sc Fv复合物中的高亲和力 sc Fv。这种技术在实验中不用任何细胞 ,是第一个完全在体外筛选有功能蛋白的方法。
该技术克服了其他一些蛋白质筛选技术 (如噬菌体展示 )需转化细菌或真核细胞 ,因效率不高而降低库容 ,减少抗体多样性的局限 ,并避免了宿主随细胞基因组复制过程中可能丢失而产生的库容下降 ,同时亦解决了因抗体筛选条件不利于宿主细胞生存而导致抗体丢失这一难题。由于核糖体展示技术的体外翻译、体外筛选的特点 ,大大缩短了实验周期 ,具有省时省力、方便快速的特点。
ribosome技术和SELEX技术一样,可用于定向选择性进化研究,发现新功能的生物大分子。
建议讨论从如下方面展开:
1、基本原理
2、具体实现方法/手段
3、应用领域(抗体库的筛选、哺乳动物受体结合位点的研究、病原微生物功能性蛋白质的抑制剂等)
4、优缺点
5、相关技术发展概况
6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评
7、其他
本版前期的明星技术:
1. 【交流】核酸版2005年8月份明星技术: allele-specific expression assay
2. 【交流】核酸版2005年7月份明星技术: In vitro site-specific mutagenesis
3. 【交流】核酸版2005年6月份明星技术: nuclear run on transcription
4. 【交流】核酸版2005年5月份明星技术: Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript: SMART
5. 【交流】核酸版2005年4月份明星技术: Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA
6. 【交流】核酸版2005年3月份明星技术:Chromatin immunoprecitation,ChIP
7. 【交流】核酸版2005年02月份明星技术:SELEX技术
8. 【交流】核酸版2005年元月份明星技术:Ribonuclease protection assay,RPA
9. 【交流】核酸版2004年12月份明星技术:Serial Analysis of Gene Expression,SAGE
10. 【交流】核酸版2004年10月份明星技术:DNA Microarray