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关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结

SDS-PAGE从胶中纯化蛋白质浸提液母液:0.5 mol/L Tris-CI pH 7.91.0 mmol/L EDTA1.5 mol/L NaCL1.0 % SDS上述各取1ml 混匀,加入6 ml 水,混匀,即为10ml 浸提液。回收蛋白方法:1. 使用厚胶,设两个样品孔,一个为蛋白marker,另一为样品。2. 电泳结束后,将Marker和少许样品带切下,进行染色和脱色。剩余样品胶置于4 ℃。3. 根据Marker和被染色的样品带,切下未被染色的胶中蛋白带。4. 称重,研碎,加入3~5倍体积的浸 ...

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蛋白纯化柱子

在蛋白柱常见问题和日常维护分离时选择了合适的蛋白柱,有时往往不能成功地完成蛋白的分离,同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果,正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键。  不论使用什么类型的蛋白柱,首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂,什么类型的样品,流速及耐压范围等,GAT提供的各种类型的蛋白柱,在柱箱内均有详细的说明书,使用柱子前,务必要 ...

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[资料] 绿色荧光蛋白GFP特性及应用

绿色荧光蛋白GFP来源及生化特性: GFP 主要来自两种海洋无脊椎动物,西南太平洋水母———Aequorea victoria 和佐治亚沿海水域的三色堇———Renilla renifomis 。上述来源的GFP ,其原始发光蛋白基团具有将蓝色的化学发光演变为绿色荧光的生物发光特性。Plinythe Elder 于公元1 世纪最早报道了这种生物发光现象。20 世纪60 年代以来,Blinks 等实验室先后研究了GFP 的生物化学特性。野生型GFP (wt2GFP) 的分子 ...

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推荐一篇蛋白质组学综述(浅显易懂)

蛋白质组学研究进展与趋势曾 嵘 夏其昌(中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学研究分析中心 上海 200031)如果在五年前提到蛋白质组学(Proteomics),恐怕知之者甚少,而在略知一二者中,部分人还抱有怀疑态度。但是,2001年的Science杂志已把蛋白质组学列为六大研究热点之一,其“热度”仅次于干细胞研究,名列第二。蛋白质组学的受关注程度如今已令人刮目相看。1.蛋白质组学研究的研究意义和背景 ...

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让人流口水的好书

Protein–Protein Interactions :Methods and Applications March 2004http://biomed.humanapress.com/BookTOC.pasp?isbn=1-59259-762-9&returntoisbn=Part I. OverviewStructural Basis of Protein–Protein InteractionsRobert C. LiddingtonQuantitative An ...

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【资源】Gelatin Zymography Protocol

1.Prepare gels (7.5%, 10% or 12%) according to the standard procedure. When preparing the running gel add gelatin stock solution (10 mg/ml in H2O) to get the gelatin concentration of 0.1% (1 mg/ml).2.Mix one part sample with one part Tris-Glycine SDS Sample Buffer (2x) and let stand 10 minutes at room temperat ...

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Mascot检索的问题

各位大侠,有个问题比较困惑,在Mascot上检索出来的蛋白并不是一一对应的,而是给出了几类蛋白,那么该如何选择呢?另外我的样本来自小鼠,如果检出的蛋白是(Rattus)的,是不是就不对呢?下面是一个例子,请各位百忙之中忙给予答复,谢谢。1. gi|27691060 Mass: 16225 Score: 67 Expect: 0.025 Queries matched: 7similar to tyrosine 3/tryptophan 5 -monooxygenase activ ...

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【资源】结构生物学、系统生物学和蛋白质折叠电子书下载

在我的G宝盘里,有空可以去看看。现在已经加到29本,不光是教材,还有实验指导书和其他。我的课题和杂事太多,不能常来,刚建了G宝盘,上传了一些书,各位也许有用,网址:http://banzhao1982.gbaopan.com/少数最先上传的书有:1. Drenth_Principles of Protein X-Ray Crystallography 3rd ed(2006).pdf2.B.O.Pallson - Systems Biology - Properties of ...

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最近一期的Nature上的蛋白质组学文章

大家都知道蛋白质组学的方法可以用来寻找药物靶点,但是对于如何寻找药物靶点,如何确证药物靶点这些具体的东西还没有一个清晰的轮廓,这使得蛋白质组学在药物靶点寻找方面还停留在概念上。而最近Nature上的一篇文章是我们看到一线曙光。Sidney Kimmel癌症研究中心的SCHNITZER 领导的研究小组采用削减蛋白质组作图的方法加快蛋白组学寻找药物靶点的工作。Nature 429, 629 - 635PHIL OH, YAN LI, JINGYI YU, E ...

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7月份无人应助贴

7月份无人应助贴整理如下:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3998234&sty=1&tpg=17&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3994250&sty=1&tpg=18&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3994953&sty=1&tpg=18&age=0http://www.d ...

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【分享】Human press METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY

我会把他们发到humanpress@56.com这个邮箱里,用户:humanpress密码:humanpress可能要1个月(老爷机太慢)我先从140.Chaperonin Protocols 向后发而后再发1-139,主要是考虑1-139年代较早,需要的人可能不多。METHODS IN MOLECULAR BIOLOGYJohn M. Walker, SERIES EDITORHumana Press Inc. Totowa, NJ www.humanapress.c ...

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【分享】100本最新分子生物学书籍Methods in Molecular Biology Volume 201-300

100本最新分子生物学书籍Methods in Molecular Biology Volume 201-300http://rapidshare.com/files/58795488/201_Combinatorial_Library.pdfhttp://rapidshare.com/files/58796259/202_Thyroid_Hormone_Receptors.pdfhttp://rapidshare.com/files/5879 ...

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质谱结果分析过程中的问题

上周送了一个考染的蛋白质点做PMF质谱鉴定,我自认为点取准了,质谱的蛋白量足够,可公司的人说我送去的样品太少,PMF做不出来,但是可以做MALDI-TOF-TOF。没办法,做了一个月的实验不能白做吧!狠下心多加了200元做了MALDI-TOF-TOF。(鉴定一个蛋白质的钱可以买一台三星的17寸显示器了)结果如下:Accession Mass Score Description1. gi|34903780 51933 67 unnamed prot ...

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【资源】蛋白质组学电子书 小书库,看看有没有你需要的!namipan下载

网络来源,蛋白质组学电子书 小书库 ,希望其中一本或几本对各位有用。:D1、Cancer Proteomics: From Bench to BedsidePublisher: Humana Press | Language: English | ISBN:1588298582 | 300 pages | Data: 2007 | PDF | 3.5 MbDescription: This book provides the reader with broad perspectives and breadth of knowledge on current top ...

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常用于蛋白的表达宿主菌和质粒

Transformation of plasmid DNA to competent E. coli cellsTransformation is the process of getting the recombinant vector from a reaction mixture or vector solution into E. coli cells. To enable the cells to take up circular vector DNA they have to be made competent. The method for the preparation of co ...

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【兴趣小组】post-doctoral positions available(恭贺新春+蛋白版小公告牌+不定期更新+局限于US)

做生物的出国特别容易,因为做生物的赚钱少;职位大把大把的,就看你找不找;PS. 不能长期做,当个跳板不错;另:加密10,挡住小马甲~~~1. Postdoctoral Research Fellow, University of Maryland, Rockville, Maryland Postdoctoral Research FellowUniversity of MarylandDepartment: Center for Advanced Research in Biotechno ...

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有关SELDI问题的总结

随着SELDI技术从美国的引进,有部分战友已经接触到了这个技术,现把园里有关的帖子总结于下。SELDI 芯片的再现性http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1115005&sty=3&keywords=SELDISELDI和飞行质谱所能检测的蛋白质的分子量范围是多少?http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=749497&sty=3&keywords= ...

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【原创】实验方法分享:用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗

很多免疫教科书上描述,人和兔子,还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。但是在实际科研中,我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化我和不少人说起过这个事,但是还是有很多怀疑和种种疑问挑战经典理论确实是件难事我摘抄了实验室一次实验与大家分享,希望对大家有所帮助简单的实验步骤,适合没有层析仪,又希望快速得到抗体的实验室(此次纯化实验耗时约2小时) ...

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[旧贴整理]最近一个月有关裂解液的问题,小结一下

呵呵希望让大家查询的方便一些也希望版主给适当加分裂解液的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3291558&sty=3&keywords=%C1%D1%BD%E2%D2%BA求教RIPA裂解液http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3391456&sty=3&keywords=%C1%D1%BD%E2%D2%BA求助:胞浆蛋白的提取必须要用到裂解 ...

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首次独立做western之真实感受~~~~~并请高手指教

前段时间在别人实验室学做western,做了若干次,感觉很容易呀!当然了,别人那试剂都是现成的,技术也成熟,每次都有结果呀!然后回自己实验室来也学着别人的样开始搞。我们这是个新的实验室,什么都没有啊,只有仪器,我买瓶瓶罐罐啊、试剂啊,然后刷刷洗洗,配各种溶液~~~~~~溶液真是多啊,我配了3天才完全配好!特别是调pH太耗时间!开始做了!做胶:别人实验室是用琼脂粉封底,我记得他们是5%,我自己一配,怎么这么稠啊(加热中)!完全搅不 ...

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