【原创】实验方法分享：用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗

很多免疫教科书上描述，人和兔子，还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。

但是在实际科研中，我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化
我和不少人说起过这个事，但是还是有很多怀疑和种种疑问

挑战经典理论确实是件难事

我摘抄了实验室一次实验与大家分享，希望对大家有所帮助

简单的实验步骤，适合没有层析仪，又希望快速得到抗体的实验室（此次纯化实验耗时约2小时）：
1，用binding buffer(PBS+1M NaCL,pH7.5-8) 的缓冲液置换0.3ml该品牌rProteinA填料的storage buffer。
2，用binding buffer等体积稀释小鼠腹水1ml（15ml离心管），10000RPM离心15分钟
3，取离心上清，把步骤1中的填料加入，室温在摇床上晃匀5-60分钟（时间越长，温度37度，能提高抗体和填料的结合率，此次实验中就晃了5分钟，导致流穿中还有一点点抗体残留;）
4,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸去上清（流穿）
5，加入10倍体积的PBS,晃匀，离心，去上清
6，重复步骤5，注意吸干净残留的PBS
7，加入1ml洗脱液（柠檬酸pH2.5-3）,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸取上清（洗脱1）到预先加好相应比例的中和液（1M tris-HCL pH 9.0/抗体：中和液=9:1加入）
8，加入2ml洗脱液（柠檬酸pH2.5-3）,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸取上清（洗脱2）到预先加好相应比例的中和液（1M tris-HCL pH 9.0/抗体：中和液=9:1加入）
9，加入1ml洗脱液（柠檬酸pH2.5-3）,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸取上清（洗脱3）到预先加好相应比例的中和液（1M tris-HCL pH 9.0/抗体：中和液=9:1加入）
10，加入1ml洗脱液（柠檬酸pH2.5-3）,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸取上清（洗脱4）到预先加好相应比例的中和液（1M tris-HCL pH 9.0/抗体：中和液=9:1加入）
11，加入5ml洗脱液（柠檬酸pH2.5-3）,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸取上清（洗脱5）到预先加好相应比例的中和液（1M tris-HCL pH 9.0/抗体：中和液=9:1加入）

另外说一下proteinA对于proteinG的优点：
1，A载量高（实际应用中达到15-30mg/ml gel，proteinG一般只有5-10mg/ml）
2,容易洗脱,也更温和（pH3-4）
3,价格便宜（我们实验室用的这个牌子进口的rProteinA只要几百块钱一毫升）
时代在进步，实验技术也在进步:P

实验结果，见附件

更多的抗体讨论见该帖子：http://protein.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=16483383&sty=1&tpg=1&age=0