转自科学网论坛 Linxubo 点：free user 下载Molecular Biology Methods Bookshttp://rapidshare.com/files/58795488/201_Combinatorial_Library.pdfhttp://rapidshare.com/files/58796259/202_Thyroid_Hormone_Receptors.pdfhttp://rapidshare.com/files/587 ...
如题。本书全面介绍目前蛋白质技术理论及应用，全书共 3843 页，够厚的吧。目录如下。Chapter 1 Strategies of Protein Purification and CharacterizationUnit 1.1 Overview of Protein Purification and CharacterizationUnit 1.2 Strategies for Protein PurificationUnit 1.3 Protein Purification Flow ChartsU ...
～～～蛋白质技术讨论版170000帖庆典活动～～～蛋白质技术讨论版作为实验技术讨论区一个重要的板块，长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护，现举办十七万帖有奖抓图活动，希望广大战友在这个充满激情的夏天变得更加富有活力。我们有信心把蛋白版办成丁香园的精品版块，我们将向更高的目标迈进！我们期待每一位战友的参与！在这里感谢大家长久以来的热心和关爱，你们才是蛋白版的支柱和主人～～～第十七万帖抓图 ...
来自 Research Laboratory for Biotechnology and Biochemistry ( RLABB)，不知道那个兄弟可以 翻译 一下：HOW DOES AN SDS PAGE GEL REALLY WORK? 06/06/2007The system most people use for separating proteins by gel electrophoresis was formulated by Laemmli (Nature 227:680-685 ). It is such a commonly used laborat ...
一、质粒绝大多数的生物都是以DNA的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！。原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质粒的基因体和原核染色体类似，是由双 ...
酪安酸差色光谱法1.打开分光光度剂，预热30分钟，是紫外灯处于稳定发光状态2.在2容积为1mlde 微量石英比色杯中分别加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸缓冲液，把盛有PH12.0缓冲液的比色杯放入样品杯中放入支架上，把盛有PH7.4缓冲液的比色杯放入到参比杯的支架上，然后准确的测出295nm波长下的光吸收值，或用250－350nm扫描3.在上述的2个比色杯中分别加入100UL的待测样品液，小 ...
外源基因在宿主细胞中的高效表达1．有效的转录起始与基因的高效表达有效的转录起始是外源基因能否在宿主细胞中高效表达的关键性步骤之一，也可以说，转录起始的速率是基因表达的主要的限速步骤。因此，选择强的可调控的启动子及相关的调控序列，是组建一个高效表达载体首先要考虑的问题。最理想的强的可调控的启动子应该是：在发酵的早期阶段表达载体的启动子被紧紧地阻遏，这样可以避免出现表达载体不稳定，细胞生长缓慢或由于产物表达而引 ...
转自http://www.51protocol.com/pro/WesternBlotting/20071031/38744.html1. 在western实验中，通常有人采用TBS，有人采用PBS，能否有人解释一下二者在使用中的区别？ 选择合适的缓冲液对于维持一定PH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性是很重要的。PBS的缓冲能力强于TBS（因为混合缓冲液在一定的离子强度下常常具有更宽的缓冲范围），TBS在PH7.0以下缓冲 ...
双向电泳实验前一天将所需的烧杯,试瓶,玻棒,量筒等泡酸.并向准备间要求大量的双蒸水.第一天,准备试剂.1.水化液Reagent Quantityurea12gChaps0.5gBromphendblue50μl 1%solution加双蒸水定容至25ml,1ml分装贮存于-20℃1)加双蒸水搅拌均匀,要求没有气泡和颗粒,否则会影响实验结果.尿素可以在27℃水浴中溶解,温度不可过高.2)DTT和IPGbuffer临用前加:1ml ...
我总结了一下：具体有几类，但有些问题想请教大家。1，由于很多蛋白有各自的特性，我们遇到需要检测磷酸化的时候，可以检索文献资料，看看是否有可靠的方法可选择。2，一些蛋白磷酸化后其生物学功能会发生改变，可以通过检测生物学功能的变化来间接检测其磷酸化是否发生。但是这个办法操作性很差，因为需要提取蛋白并且需要保证其活性，同时也需要一定量才可以达到可以检测到活性变化的水平。3，此外有非特异性的丝，酪氨酸磷酸化抗体，具体情形 ...
蛋白的复性是一个世界性的难题，没有通用的方法，甚至没有靠得住的规律，只能试。可以参考以下文章。该文出处已经忘了，如果有人知道原创作者或网上出处，请补充。包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性包涵体：包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性：一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等，环状或缺口的质粒DNA，以及脂体、 ...
后基因组时代，蛋白质研究又掀起新一轮的高潮，掌握基础的蛋白质技术，是蛋白质研究这个行当中所有人都应该做的。蛋白质技术包括太多，我在这里只想与战友们一起讨论关于蛋白质定点突变的技术。结合自己的实验研究，我翻译了一些手头的资料，拿到这里跟大家讨论，园子里高人甚多，希望我这块砖能引出更多的玉来。参考文献：PCR Approaches to DNA Mutagenesis and Recombination---An OverviewBinzha ...
我最近两个月一直在做ECL western，非常困难，都快做疯了，有几条个人经验供参考，对改善困难的非特异带和背景应该会有帮助：1. 不要用平底小盒或杂交袋，用可以旋转的杂交管（可以用50ml塑料离心管做成），我刚刚得到了比较结果，效果大不一样。2. 膜在blocking前先用stripping buffer处理一下（当然也在杂交管中进行，注意要通过旋转使处理均匀）。我偶然发现经过该处理后背景异常干净。并且经多次重复后得出此经验。 ...
以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上， ...
读硕士时曾经想发表的关于蛋白印迹法（Western blot）的使用体会，但因为缺少较多样本对比分析，所以没有投得出。但我觉得实验中经过一些挫折后得到些体会，应该与大家分享一下。否则有点可惜了。也希望由此获得加分机会。蛋白印迹法的使用体会蛋白印迹法（Western blot）是分子生物学实验中研究蛋白质的一种重要方法。可用来半定量测定标本中的目的蛋白。由于标本中目的蛋白含量有限，为提高检出率，最后一步可以用化学发光法替 ...
整理了一下十月份无人应助贴，以支持版主的工作已被锁、被扣分、标题为空以及不符合发贴格式的无人应助贴不在此列应助战友请到积分申诉区给出链接，谢谢【求助】我想求教一个关于WESTERN的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4772826&sty=1&tpg=7&age=0【求助】 请问有做pgap表达系统的么http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id= ...
下面这个网站，大家可以看看。http://www.stcsm.gov.cn/learning/lesson/shengwu/20030211/lesson-1.asp第一课 概论 一、蛋 白 质 组 学（Proteomics） 90年代初期开始实施的人类基因组计划，在经过各国科学家近10年的努力下，已经取得了巨大的成就。不仅完成了十余种模式生物（从大肠杆菌、酿酒酵母到线虫）基因组全序列的测定工作，还有望在2003年提前完成人类所有基因的全序列测定。那 ...
觉得这篇文章不错啊，贴出来与大家分享！恳请版主加分！真核表达系统的研究进展经络 陈勇自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就。在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体 (一般为质粒)转化细 ...
选择性阻止大脑中称之为11beta-HSD1的酶在实验中成功逆转了年老小鼠的记忆丧失， 在全球人口老龄化的背景下，这一研究成果将有深远的影响意义。—— Docofsoul Promising Drug Candidate Reverses Age-Related Memory Loss in MiceScienceDaily (Oct. 13, 2010) — Researchers at the University of Edinburgh report a new experimental compou ...
在这个领域做了一段时间的工作了，下面根据个人经验，介绍几个“蛋白质表达”纯化相关的SCI/SCIE杂志，希望对新手能有所帮助。其实收载蛋白表达纯化的杂志有很多，只是看杂志主页的介绍，似乎多数biotech相关的杂志都是收载的，但实际上并非如此，很多杂志只要新蛋白，或者新技术，或者有别的特殊要求；而版上多数朋友的工作可能是应用相关的，研究没有好坏，杂志不分高低，只是在选择杂志时稍微用心一下，可能为后面的审稿及修稿省去 ...
