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【求助】G418筛选

yn850307 请大家帮忙提供G418筛选的具体步骤和注意事项。谢谢!zhujoker 筛选之前确定G418浓度:1,由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同,一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。2,G418是新霉素的类似物,两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码 ...

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【求助】免疫组化, FISH, CGH, LOH, MSI, 克隆性重排等的应用范围及应用”盲点”

香溢 免疫组化, FISH, CGH, LOH, MSI, 克隆性重排等的应用范围及应用”盲点”。请教各位高手,这个题目怎么回答?马上就要考试啦,答不出来,太难了!!谢谢minmin4003 同问啊~~~illusionistx 大家都是校友……ellem 免疫组化的应用范围答:(1)提高病理诊断准确性(2)对疾病的预后和治疗的意义(3)癌基因蛋白的应用(4)对肿瘤增生程度的评价 ki67 PCNA(5)微小病灶的发现 微小癌 微小病灶(如羊水栓塞)(6)在肿瘤分期上的意义(7)指导 ...

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【求助】基因拼接

qxxie215 这几天在做基因拼接,看的文章不多,但是发现这个拼接的linker有不同:(G4S)n和(S4G)n两种,哪位高手解释一下,这两个有什么区别?谢谢!zjubell 发现这么多天了回复仍然是0.主要是lz的问题根本很难看懂。什么叫基因拼接?是两个基因拼成假基因?重排?还是测序后的序列拼接?woxingwosu 最好还是把原始文献弄出来看看吧?(G4S)n和(S4G)n这两个东西连google都查不到呀。。。qxxie2 ...

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【求助】基因工程研究策略与实践一问题的解答

泌外医师小李 在培养液中加入a蛋白质可以提高骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的分化率,但a蛋白质使用周期长且价格昂贵,请用基因工程解决这个问题。小弟无才,在此请教各位高手,望不吝赐教,谢谢!woxingwosu 估计是要自己克隆表达蛋白吧。zhujoker 你如果是应试,在这儿找不到什么好的答案的。这个问题你还不要说,即使是做原核表达,还不定能够做到你想要的那种纯度以及质量,建议你如果不是专业性的实验员,你还是在其他方面省省, ...

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【求助】做miroRNA哪些公司比较好

xcydcg 各位大虾:本人近期想做miroRNA方面的试验,想请教各位哪些公司做这方面比较强,北京有没有,还有,大家觉得芯片哪些比较好呢?谢谢各位了:)版主freecell留言:当然是ABI的较好一些,自己搜搜就能找到的啊!或者找个销售员问问就清楚了吧!xujian2004265 你是做哪方面的?xcydcg 好,谢谢各位了。我主要想代理一个公司帮忙做有关miRNA的东西,所以想看看各位有没有什么经验,哪家公司做的比较好。h ...

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【求助】RACE 怎么做啊

newchaoren race 怎么做啊woxingwosu 下面是wiki的介绍资料,我想你可以参考一下。另外两个protocol给你看看,不过条件需要自己摸索的哦。RACE, or Rapid Amplification of cDNA Ends, is a technique used in molecular biology to obtain the full length sequence of an RNA transcript found within a cell. RACE results in the producti ...

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【求助】DNA甲基化如何定量分析?

sunside 各位前辈好!刚开始做这方面的研究,想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测?非常感谢!!zhujoker MS-HRM方法 是一种新的定量检测甲基化的方法 ,它是基于亚硫酸盐对DNA进行修饰后具有不同的碱基构成,导致甲基化和非甲基化模板扩增后的产物热稳定性不同而进行检测zitong1983 sunside wrote:各位前辈好!刚开始做这方面的研究,想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测?非常感谢! ...

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【求助】如何证明一个蛋白参与一个信号通路

xxshc 我有A蛋白的转基因鼠和对照鼠。想证明A蛋白参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通路。TCR激活后可以激活ras,MEKK,MEKKK等。是不是我首先看各通路下游的蛋白磷酸化水平在两种鼠之间有无差异。有差异再向上寻找?是可以通过这个初步筛选吗?第一次做信号通路,希望得到大家的帮助。谢谢!kern6549 先不要找参与哪一条通道,先要确定是否参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通道。可以用常规的活 ...

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【求助】关于启动子区域

smu 各位战友:最近我在搜索一个真核基因的启动子区,然后在启动子区寻找一个转录因子的结合位点,我找了转录起始点的上游2000bp至转录起始点下游200bp,结果在转录起始点下游150bp附近看到一个结合位点,请问战友们:转录因子的结合位点可以在转录起始点下游吗?谢谢各位大侠!kinguangjun 转录因子的结合位点有些是在转录起始位点的下游smu 谢谢,一般下游多少范围呢?zitong1983 转录因子的结合位点可以在 ...

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【求助】如何查询一个基因内含子的5' splice site 和 3' splice site ?

霍一刀hxs 是否有战友知道:如何查询一个基因内含子的5' splice site 和 3' splice site ?谢谢。woxingwosu 看看是否是这个?http://www.life.umd.edu/labs/mount/RNAinfo/consensus.html霍一刀hxs woxingwosu wrote:看看是否是这个?http://www.life.umd.edu/labs/mount/RNAinfo/consensus.html谢谢。祝科研顺利。 ...

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【求助】请教给位站友,通过RNAi技术使基因不表达。希望各位站友多多帮忙。

三叶虫 站友们,你们好:我们准备通过RNAi技术使成骨细胞的雌激素受体不表达(或表达减少)。由于从来没有做过这方面的实验,希望各位站友能简单给我们讲述这个过程,哪些是要请公司做的,哪些需要自己操作。需要什么特别的实验设备仪器。据个人了解:1,制备一种东西,能切除特定的基因。(如何制备?如何设置阳性和阴性对照?)2,这种东西作用于细胞。(使用什么方法?)3,检测细胞的基因是否有变化(设立通过PCR,WB等。)4,还有什么其他的方法, ...

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【求助】检测细胞整体乙酰化水平的方法

janetlee1976 我记得从前看到过检测细胞总体的蛋白质乙酰化水平的方法,大概是免疫荧光或者共聚焦显微之类的方法,现在找不到了,不知道哪位知道,请赐教(不是检测某种组蛋白或某种蛋白质的乙酰化)。可否提供参考文献?谢谢!woxingwosu 免疫荧光后再共聚焦应该是可行的,或者是western也行。目前除了蛋白特异性的乙酰化抗体以外,还有一些针对乙酰化赖氨酸(Lysine)的抗体Acetylated-Lysine An ...

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【求助】有谁知道腺病毒能否从国外邮寄过来?

genechip 我跟一个英国科学家要了腺病毒,对方答应给了,但不知道是否可以通过Fedex邮寄,海关那边会不会查,要不要申报?另外由于是我这边付费,邮寄过来大概要多少钱?genechip 有人知道吗?思路迪腺病毒 如果通过Fedex寄,那就得碰运气,海关是抽查的,抽到了,你就要官方证明等文件。另外,对方寄的时候也要官方证明,但不知对方国家是否同意邮寄这类病毒性玩意?好在腺病毒比细胞运输好,不容易死,拿来后可以立即扩增,然后重 ...

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【求助】慢病毒转染人间充质干细胞的效率是多少啊?

boboshining 慢病毒转染人间充质干细胞的效率是多少啊?谢谢kinguangjun 我做过用慢病毒感染人脐带血间充质干细胞和人脂肪间充质干细胞,其感染效率大概在50%~80%之间,人脐带血间充质干细胞比人脂肪间充质干细胞的感染效率要高一些.易冰 我现在也很想知道,慢病毒是不是转染有种属性质,我用构建好的慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,基本上没有多少转染成功的。本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

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【求助】N-乙酰半胱氨酸怎么对大鼠原代肝细胞有损伤

heward N-乙酰半胱氨酸DMEM配成50mM母液,NaOH调PH值6.8,然后稀释成10mM、5mM、2.5mM加到大鼠原代肝细胞中,即使不加肝损伤药,单加N-乙酰半胱氨酸,细胞的存活率也在降,与药合用后细胞存活率降得更多,为什么?请教高手,NAC不是对肝损伤有保护作用么?怎么按照上面的方法加了下反而增加毒性?kern6549 不知道你说的单加NAC细胞的存活率也在降的结果是怎么得出来的?有没有设置NAC浓度为0的对 ...

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【求助】求助急!!!!!!!!!!谁能跟我讲一下!

neuroclong 谁能告诉我一下casepase-independent cell death有哪些,查了相关文献查不到,我写东西到最关键的地方,就是差找个了,急啊急,有哪个高人给我讲一下吧kern6549 个人意见,仅供参考:caspase-dependent cell death应该指的就是凋亡吧。那么caspase-independent cell death可能就是除了凋亡外的细胞死亡,如坏死,自噬等。neuroclong 当然是凋亡 ...

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【求助】组织中细胞因子检测方法

xjcaoliqiong 各位战友,IL-10等细胞因子在组织中检测能否不经过培养,直接匀浆提上清液做免疫组化?刚刚接触实验的新手衷心请教,谢谢!kern6549 两种方法:1、免疫组化检测IL-10。2、组织匀浆ELISA检测IL-10。请不要相混,匀浆还怎么做免疫组化。xjcaoliqiong 谢谢了!zaiju512 呵呵非专业选手wuushark 细胞提cdna,QT-PCR也可以测。本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意 ...

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【求助】细胞低氧培养箱

zcy20002001 请问上海哪里有可以做细胞低氧培养的地方,本人想做低氧条件下细胞的信号转导,谢谢!j19s87x 有意可以联系我QQ:59405497 以前做过,也在上海zcy20002001 没有QQ号,请问你在上海哪个大学或研究所,或者留一个msn细胞超人 现在很多人都在作信号转导 ,我女朋友博士课题也是在做,挺麻烦的,要做很长时间常能出结果,你去别人那儿做是啥意思,花钱用人家设备,还是跟他们老师合作。北京这边很多也是做低 ...

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【求助】NF-KB p65活性测定

wachjun2000 请教各位高手,我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用,想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题:1、NF-KB p65存在不存在磷酸化?如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体?2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体,也有文献采用的是磷酸化的抗体,所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核,所以测核内普通的NF ...

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【求助】分子生物学如何入门

清泉煎 本人研究生即将学习生物化学与分子生物学,本科还没有基础,求高手指点,现在应该做好什么准备工作freecell 先买一本本科的教材,仔细自学一下。pengqianjin 以我的经验,最后买这些教材:无机化学、有机化学、生物化学,真正静下心来好好研读,一般3个月就差不多了。无机化学是比较基础的,跟高中学的化学有一定联系。有机化学又是以无机化学为基础。devil19840 用不着从无机化学、有机化学开始学,直接拿一本权威的生物 ...

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