陆军鱼 小弟通过转化感受态扩增pGL-3 Basic、control，pRL-SV40三种购买来的质粒，小提后电泳检验一下扩增的成果，结果让我不太理解，为什么质粒大条带后面还有“杂带”呢？12道，34道，56道都是从一块板上挑的两个单克隆，两个道的质粒在相应的位置都有杂带感受态经抗生素板检验没有污染不知道这样的杂带怎么解释？woxingwosu 这个可能是正常的吧（除了3和4有点怪怪的以外，建议再重新跑胶或者重新提质粒看看） ...
gaoxiaomeng :^)woxingwosu 基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止？如果是这样，那就没有多少选择，直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNNNN (注意要互补的~~)zjubell woxingwosu wrote:基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止？如果是这样，那就没有多少选择，直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNN ...
tianjiaoya PJ694α (MATa trp1-901 leu2-3,112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2 ∷GAL1-HIS3, GAL2-ADE2, met2∷GAL7-lacZ).gingivalis Check here:http://www.yeastgenome.org/alleletable.shtml%22dnazyme 对，分段查看就懂了，例如，MATa是结合型， Δ意味着缺失突变。本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...
whiteswan 本人按文章要求，将1mg SP600125溶于125ul DMSO成透明溶液，然后将上述125ul溶液添加于1375ul PBS,有絮状沉淀析出，请高手帮忙指点解决该沉淀析出问题，谢谢！whiteswan 似乎应该xiemengxipan 请问楼主的实验做完了没，能否传授点经验给我呀，我也在做这个实验，方便的话留个QQ交流下。不安分得土壤 xiemengxipan wrote:请问楼主的实验做完了没，能否传授点经验给我呀 ...
tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列 ...
silencemm1015 请问，我怎样才能知道TS,TP,MTHFR,DHFR这几个酶的基因突变频率？如何去查相关文献？在哪查？谢谢！woxingwosu 最好写的具体以一点吧。。。NCBI上查一查也应该能够搞定的，只要关键词搜索得当的话。silencemm1015 谢谢！但是查不到想要的东西woxingwosu 呵呵，NCBI上都查不到的话，估计就是还没有人做了。。。silencemm1015 可能还是关键词用的不当吧。我再查查看， ...
taijiwu 据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答路得自己走 taijiwu wrote:据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答路得自己走 taijiwu wrote:据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答不知是否 ...
w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:)woxingwosu 看看这个有没有帮助了：http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR322质粒的信息吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以 ...
taijiwu 我测了一段miRNA的种子序列，如何查找它存在于哪一段基因的区域内，BLAST、miRBase、TargeScan如何使用，还请各位战友提供帮助。谢谢！woxingwosu 有了目的序列后这个我想BLAST应该可以出来了吧。具体做法你自己摸索估计比让人在网上教更快。当然什么具体问题可以提出来。mirbase和targetscan也是一样。下面的连接是NCBI的中文教程，希望对你有所帮助。http://bi ...
taijiwu 给一个miRNA极其序列，如何查找它的转录起始位置，存在于哪个基因片段的内含子区域。请高人指点。霍一刀hxs taijiwu wrote:给一个miRNA极其序列，如何查找它的转录起始位置，存在于哪个基因片段的内含子区域。请高人指点。这两个网址。http://www.mirbase.org/http://biochemistry.dxy.cn/bbs/topic/15429796?tpg=1&age=0taijiwu 能否介 ...
flhua 今天看文献，看到有人用这样MycHis-tagged载体，不知是何原理，请大家解释一下。这是我刚才查到的内容：“载体名称：pcDNA3.1/myc-His载体类型：哺乳动物细胞表达载体: 载体大小：5.5kb (5493 bp)载体宿主：大肠杆菌，哺乳动物细胞（E.coli, Mammalian cells）细菌抗性：氨苄西林（Ampicillin）真核筛选标记：新霉素（Neomycin）5' 测序引物：T7 prime3' 测序引物：BGH primer ...
candyjiang 1.知道某启动子序列用什么方法将其克隆出来？2.将启动子碱基数太多，如何将其中某一段已知序列克隆？cedar1985 设计引物,PCRcandyjiang 序列太长了，有5000多个碱基，那我是要把我启动子的其中一段用PCR扩增出来？？模板从cDNA文库中调取？？我们自己实验室没有cDNA文库，找哪个公司做比较好（广州）thltyz 启动子没有在cDNA文库中，在genomic DNA中，用DNA为模板才能扩出来 ...
豪斯 请问版内高手一个问题，目前有哪些机制可以在上游调节miR，有没有相关的文献，谢谢LoftyMan 基本的就是RNA polymerase II吧，其他的一开始分为cellular和viral好学习一些这么火爆的话题，在Nature搜索一下microRNA的Review就行了，08年Bryan R. Cullen有一篇，最近他又有一篇新的所谓上游的调控，这个问题我觉得可能比发现miRNA的新target更难，建议楼主暂时不要考 ...
lingwu 本人做WB检测加入因子后p-AKT的变化，结果显示15分钟和30分钟条带叫空白组弱，而到60分钟条带开始增强，6小时达到高峰（较空白组高），这种情况是不是表明因子能够激活p-AKT？是不是一种迟发的激活方式，其上游是不是还有其他的信号转导过程？zhanghai123 总AKT是否也增高了？kern6549 建议重复实验，如果确实得到先弱后强的结果。个人认为加入你的因子后AKT的磷酸化过程可能比较复杂，不能简单 ...
proteining 如题，我的实验是缺氧复氧处理脐静脉内皮细胞，一组实验细胞给予适当剂量的P38抑制剂SB203580，在进行缺氧复氧，另外一组不加直接缺氧复氧处理，（另外组此处略去），我得出的结论是加入SB203580预处理的组，其磷酸化的P38的水平显著低于未加SB203580组，也就是它可以抑制P38的磷酸化，我看国内外大部分的实验也是得出的中国结论，但是审稿人却找出了一篇99年BBRC的文献，来质疑我的 ...
凉石榴 譬如说 hsa-mir-196 这个hsa是什么意思呢 ？woxingwosu 呵呵，这个应该是代表物种吧。 hsa代表Homo sapiens （人）。zjubell 凉石榴 wrote:譬如说 hsa-mir-196 这个hsa是什么意思呢 ？贴一下常用的脊椎动物的：另附一份所有的Homo sapiens (human) hsaPan troglodytes (chimpanzee) ptrMacaca mulatta (rhesus monkey) mccMus musculus (mouse) m ...
海之泪 有做过ChIP的高手不？我用冷泉港提供的protocol（http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2009/9/pdb.prot5279#R42）1. Add 27 μL of 37% formaldehyde per milliliter of cell culture (in growth medium on tissue culture plates or in tissue culture flasks) while slowly shaking the ce ...
xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。北京rnai 前一段时间提过全血，是用tirzol提的，但是效果不是很好，一种方法是采血后直接-80冻存，提的时候加trizol另外一种是用淋巴分离液分离后提的，效 ...
师赠王老吉 在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？liushan8_9 白细胞或者红细胞的细胞膜应该是一样的吧。yyf87255300 在提取外周血DNA时，成熟的红细胞内没有核，所以裂解的外周血的白细胞，我们实验室用的裂解液是三蒸水zjubell 师赠王老吉 wrote:在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？看你这个词是出现在哪的。如果你 ...
xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。zhujoker 首先请你珍惜你的标本，还有就是一个问题，一般我们所谓的血指的是血清样本，建议血液立即处理，因为不处理的话会出现以下几种情况：1，溶血；2，RNA的降 ...
