【求助】酵母的GLA4转录因子能调控质粒上蛋白的表达吗?
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我想构建一个真核表达质粒,用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白,但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控,也就是说有GLA4存在,这个质粒就表达绿色荧光蛋白,没有GLA4存在,就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整,但是我现在的问题是,转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒,进行调控?据说GLA4上有核定位元件,要是将这个核定位序列删除,可行吗?据说核内有很多的辅助因子,参与了蛋白表达的调控,单单靠GLA4不知道能不能起到调控蛋白表达的目的?有这方面的文献吗?先谢谢各位大侠的帮助了!!!!
类似GAL4-UAS系统,楼主可以借鉴这个系统。GLA4可以用pGBKT7或者pBIND上的,做成删除NLS序列的GAL4(BD+AD)或者GAL4BD-VP16。此质粒还可融合你要研究的蛋白,上游可以加调控元件。
另一个质粒用UAS序列打头,后置报告基因就行啦!
另一个质粒用UAS序列打头,后置报告基因就行啦!
版主dnazyme留言:
直接用不含NLS的GAL4,岂不是更简单?不知道具体哪一段是NLS序列。
直接用不含NLS的GAL4,岂不是更简单?不知道具体哪一段是NLS序列。
shilei5794749 wrote:
类似GAL4-UAS系统,楼主可以借鉴这个系统。GLA4可以用pGBKT7或者pBIND上的,做成删除NLS序列的GAL4(BD+AD)或者GAL4BD-VP16。此质粒还可融合你要研究的蛋白,上游可以加调控元件。
另一个质粒用UAS序列打头,后置报告基因就行啦!
呵呵,以前看到过有人把NOTCH1的intracellular domain连上GAL4-VP16,然后共转UAS-Reporter。相当于一个直接结合的报告基因系统。UAS-Reporter可以改造pG5Luc载体。
NLS序列在pACT的vp16AD或者pGADT7的gal4AD的上游处,都是SV40NLS,说明书上就有。
呵呵,我不知道常用载体里有没有不带NLS的GAL4序列。GAL4-UAS系统思路及经典文献可以参考93年development上Norbert Perrimon的文章。
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