【讨论】请问有谁用过这样 MycHis 载体,他具体是什么功能,谢谢
丁香园论坛
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今天看文献,看到有人用这样MycHis-tagged载体,不知是何原理,请大家解释一下。
这是我刚才查到的内容:
“载体名称:pcDNA3.1/myc-His
载体类型:哺乳动物细胞表达载体
: 载体大小:5.5kb (5493 bp)
载体宿主:大肠杆菌,哺乳动物细胞(E.coli, Mammalian cells)
细菌抗性:氨苄西林(Ampicillin)
真核筛选标记:新霉素(Neomycin)
5' 测序引物:T7 prime
3' 测序引物:BGH primer
载体简介:pcDNA3.1/myc-His A 可以在哺乳动物细胞中高表达, 通过G418持续筛选得到目的基因稳定表达的细胞系,载体携带的 myc抗原表位基因表达后能通过HRP(辣根过氧化物酶)标记的抗myc抗体检测融合蛋白,载体C端携带的六组氨酸标签能使表达蛋白通过镍柱纯化”
这是我刚才查到的内容:
“载体名称:pcDNA3.1/myc-His
载体类型:哺乳动物细胞表达载体
: 载体大小:5.5kb (5493 bp)
载体宿主:大肠杆菌,哺乳动物细胞(E.coli, Mammalian cells)
细菌抗性:氨苄西林(Ampicillin)
真核筛选标记:新霉素(Neomycin)
5' 测序引物:T7 prime
3' 测序引物:BGH primer
载体简介:pcDNA3.1/myc-His A 可以在哺乳动物细胞中高表达, 通过G418持续筛选得到目的基因稳定表达的细胞系,载体携带的 myc抗原表位基因表达后能通过HRP(辣根过氧化物酶)标记的抗myc抗体检测融合蛋白,载体C端携带的六组氨酸标签能使表达蛋白通过镍柱纯化”
这个载体应该是同时带有两个标签(tag),即Myc和His,这两个标签是很常用的纯化和检测标志,也就是说这个载体表达的蛋白应该可以通过myc和his tag两个标记来进行纯化。关于他们的简介可见下面连接:
http://en.wikipedia.org/wiki/Polyhistidine-tag
http://en.wikipedia.org/wiki/Myc-tag
http://en.wikipedia.org/wiki/Polyhistidine-tag
http://en.wikipedia.org/wiki/Myc-tag
谢谢高手woxingwosu 的指教,就是说his tag可以纯化蛋白,而myc可以坐western检测目的蛋白的表达量,收获,呵呵...
是的。而且有两个不同的tag可以进行两步纯化(这两种纯化是不同的原理),从而得到更纯的蛋白,我觉得这个质粒用来探索已知蛋白的相互作用蛋白都是可行的。
恩,有道理,文章就是用his纯化后,myc检测蛋白之间的相互作用的,感谢
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