【求助】我扩增的质粒泡椒怎么是这样?
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小弟通过转化感受态扩增pGL-3 Basic、control,pRL-SV40三种购买来的质粒,小提后电泳检验一下扩增的成果,结果让我不太理解,为什么质粒大条带后面还有“杂带”呢?12道,34道,56道都是从一块板上挑的两个单克隆,两个道的质粒在相应的位置都有杂带
![](http://bbs.bbioo.com/data/attachment/forum/201011/22/193015s7suqt62tsuasjup.jpg)
感受态经抗生素板检验没有污染
不知道这样的杂带怎么解释?
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感受态经抗生素板检验没有污染
不知道这样的杂带怎么解释?
这个可能是正常的吧(除了3和4有点怪怪的以外,建议再重新跑胶或者重新提质粒看看)总体问题不大,我们纯化的质粒有时候含有三种形态的:闭环(超螺旋),开环和线性的。这几种形态的质粒在电泳时候的迁移率是不同的,其中闭环的迁移率是最高的,也就是跑的最快的,线性是跑的最慢的,从而在电泳过程中形成了三条带。
实在不放心就去测序吧,方正现在测序方便着呢。
实在不放心就去测序吧,方正现在测序方便着呢。
恩,说得也有道理,开环、线性和超螺旋状态;我把原装的质粒(promega)拿出来跑了一次胶,也是这样,有两三条带,是不是说明这样的产品不好用哦?
陆军鱼 wrote:
恩,说得也有道理,开环、线性和超螺旋状态;我把原装的质粒(promega)拿出来跑了一次胶,也是这样,有两三条带,是不是说明这样的产品不好用哦?
非也,出现这样的三条带,是完全可以接受的,完全可以正常使用。
我也遇到相应的情况,也解释不通(除了三条带以外,还出现其他的条带),但没影响下游的操作。
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