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【求助】关于NF-kB信号通路

zhangdepu_410 有做出过或者是看到过关于NF-kB激活了,但是snail却被抑制的实验么?我最近做一个实验就出现了这样的结果,查了一些文献NF-kB都是激活snail的,让我很是困惑,希望大家帮帮我!感激不尽!paroxysm 1.检测的NF-kappaB是转录水平上的激活(EMSA等等)还是磷酸化形式的上调(WB),这里面有些不同。2.检测snail的负调控元件和抑制通路。zhangdepu_410 paroxysm ...

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【求助】我是菜鸟!

cpumxl 我现在想让公司帮我全合成所要表达蛋白的核酸序列,这个序列是在NCBI中找到的mRNA序列中的CDS区(不知道这样做可不可以),合成的序列要在大肠杆菌中表达,那么这个CDS区中的核酸序列要不要先优化成大肠杆菌偏爱性密码子再去合成啊?谢谢!qing0831 jiawo qq2582634920济南基美 最好要优化。本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙 ...

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【求助】MAPK通路的抑制剂分种属吗?

dyp1998 我想请问各位前辈,我想在大鼠细胞中阻断MAPK通路,请问MAPK通路抑制剂有分种属的吗?除了SIGMA公司的还有哪个公司的比较好啊?谢谢。dyp1998 那位大侠能回答我这个问题啊,谢谢了!dyp1998 顶上去蛋蛋豆豆 我也要买这个抑制剂,不知道是选择PD98059还是U0126xiaoxiaoga selleck chemicals 的抑制剂我用过 觉得性价比要比sigma的高很多,而且送货周期也比较短,前些日子还用了 ...

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【求助】请教:有哪几种细胞可以验证猪某种基因表达载体的表达情况

linjl010 各位专家,我构建了一个表达载体,大小接近9K,目的是想验证猪的该基因表达情况,所以可以转染哪几种细胞,希望用一种转染效率高的细胞。谢谢大家!shylook hela咯章信来 293也成的本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】RT-PCR怎么会有两条带

小鱼鱼小溪溪 条带有两条。一条为目的条带,479bp,另一条不知道是不是非特异性条带,241bp,两种条带都很清晰,如图所示:前三个泳道是样品,后三个泳道为内参。循环条件:94℃5 min;94℃30 S,60℃30 s,72℃30S,34个循环;72℃5 min。退火温度提高至62℃,仍然为两条条带,不知道是条件的问题还是引物特异性的问题,请教各位高手帮我解答。济南基美 如果普通PCR定量,可以不用管它,但从位置看是不是污染了内参的引物wgfki ...

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【求助】求助,Luciferase Reporter

xingzhe20100228 各位实验前辈好,本人课题需要检测药物处理后wnt/beta-catenine的活性变化,用Luciferase Reporter方法,如何做?没经验,迫切需要各位高手前辈指点。是不是不用转染,直接加裂解液啊?文献都是一笔带过,晕得找不着北,不胜感激!毕业是老板不急的,怎样做你自由发挥,就这点钱,不够你自己再想办法,真希望有人管哪!毕业在即,要命呢!shylook 文献怎么可能是一笔带过呢多看文献 绝对 ...

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【求助】有哪位高手做过乳腺癌her2基因的FISH杂交?

huazhan5 有没有自制探针的?而不是去买已经合成好的探针。。。希望可以交流哈~huazhan5 有没有人啊~帮帮我啦。biolinkphilic 可以看看这张帖子http://www.dxy.cn/bbs/thread/13765082其实做探针的进口试剂费用也不便宜。国内现在也有公司可以合成。huazhan5 biolinkphilic wrote:可以看看这张帖子http://www.dxy.cn/bbs/thread/137650 ...

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【求助】反义转录miRNA

southern 我用一段序列来搜索可能作用的miRNA,结果中出现“ — strand”,这是不是指反义链转录的?那么它们是如何发挥作用的呢,会不会和+ strand 转录的发生互补而作用抵消了呢?295546 你是怎么搜索的?southern miRBase有一个by sequence框,将序列粘贴进去,其他参数都不动,只选择了homo sapiens本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师 ...

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【求助】质粒转染细胞,western鉴定不行,求助

whm5869 我构建了一个质粒,包括目的基因片段和一小段启动子,测序结果完全正确,我们实验室的工作人员说理论上应该表达但是我转染细胞做WESTERN鉴定,就是不表达,请问这是为什么啊,谢谢各位大侠了whm5869 我用的是polyjet转染试剂,操作等基本没问题,谢谢大家了pharmaceutic 以前我站构建质粒的时候也遇到过这种问题,最后换了一个载体以后就表达了。最后分析认为不同的基因可能有启动子喜好,一般情况下 ...

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【求助】熟悉β-cantenin通路的请进,帮我解释一下这张图,谢谢!

兔巴哥 请看下图:图片描述:A diagram of the signaling pathways acting on β-catenin (shown in red) that are involved in breast cancer. The most studied of these is the Wnt pathway, which stabilizes β-catenin by inhibiting its N-terminal phosphorylations and ubiquitination. This allows β-catenin to accu ...

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【求助】关于胶回收的问题

dxhly 我每次用PROMEGA胶回收试剂盒回收时,效率都很低是什么原因?我的目的片段为8.8kb左右,我大概加了6ug的DNA进行电泳,胶回收后最后用30ul elution Buffer 洗脱DNA时,浓度总数很低,一般在10ng/ul以内,影响后续实验,请各位高人指点,不胜感激!shylook promega的不应该这样差其实天根的就摇菌很好了割胶时尽量割小点严格按protocol操作xxzjcg 可以多加DNA上样,再割胶 ...

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【求助】如何做siRNA干扰试验,急!

tongenjuan 本人对试验基本不通,刚要开始做试验,涉及到siRNA干扰技术,上网查了一下,可是不是很明白。求助各位朋友教教我。试验大概要分别干扰3个不同的基因表达,在肿瘤细胞中做,是用体外转录siRNA还是shRNA表达载体好?我都要准备什么?shylook 干扰掉直接做wb或者其他检测的话 化学合成的就够了细胞只能用一次一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次要做后期实验比如干扰后一周要用细胞的话shRNA表达载 ...

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【求助】激光共聚焦与线粒体图片~~~

wj2002yx 各位大侠好:本人最近做的是关于线粒体损伤相关的研究,用线粒体抽提试剂盒,抽提的线粒体,但是在提取的线粒体的纯度,以及是否是线粒体方面,急需要一个形体上的支持,但我们学校没有电镜设备。所以想用激光共聚焦显微镜,不知道是否能看到线粒体的形态,不知道给位前辈有没做过的,能不能给一个详细的protocol。谢谢了~~~wj2002yx 没有人关注的吗??自己先顶顶~~~天乐盼盼 帮楼主顶一顶!dongweiguang 帮楼 ...

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【求助】如图所示,请问Dgrc8,再上标fl/fl,代表什么意思呢?

liyouqiang666 如上图所示,请问Dgrc8,再上标fl/fl,是什么意思呢?liyouqiang666 档住看不到了,我重发一个.丝路蓝缕 表示该基因被Cre锚定,该小鼠与表达Cre酶的转基因小鼠交配后可以得到该基因敲除小鼠本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】急!化学合成的siRNA溶解是否和引物类似需要4度过夜?

小小学药者 请问各位大侠,我看说明书上说化学合成的siRNA 用DEPC水震荡溶解 有位师姐建议说类似于引物需4度过夜 这样才能溶解完全 但这样会不会使得siRNA降解呢? 是否可加DEPC水溶解后立即用于转染呢?baby_susan 一般操作步骤是:1,拿到在公司合成的siRNA后,一般是干粉状得,先高速离心半分钟左右,目的是使在运输过程中飞到管壁上的粉末积聚到管底。2,然后根据实验浓度和公司提供的说明书加适量的DEPC水进行溶解,, ...

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【求助】siRNA干扰后干扰效果的检测

泡泡龙2005 最近想做siRNA,干扰效果的检测除了RT-PCR和WB以外,用流式检测可以吗?WB怕细胞不够用的,请教各位大虾!谢谢可以ibsbio 可以的!但是必须在RT-PCR,WB有一定效果基础上!biolinkphilic 主要是看你那个蛋白的表达是不是高表达的,如果不是高表达的话,用流式更难检测出来。因为流式缺乏一个信号放大的过程。华因康基因公司 为什么不做shRNA呢?本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思 ...

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【求助】关于长片段DNA ,PCR保真性问题的讨论。

laide 各位PCR高手:本人新手,想要用PCR的方法,用高保真的DNA聚合酶扩增一段长度为2700bp的DNA,用于基因克隆。但本人担心PCR后产物片段可能突变。由于没有做过,我想实验前预先评估一下整个实验的风险。故向各为有经验人士请教,用高保真的DNA聚合酶扩增,能否保证2700bpDNA不突变?还有哪些可行的措施可以保证整个PCR过程的保真性?欢迎各位高手赐教。济南基美 循环数不宜太多,突变在PCR中是积累的。 ...

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【求助】肿瘤组织DNA和血液样本DNA测序时是否应该一致的?

cssc 如题,一个肿瘤患者,用他的肿瘤组织DNA和血液样本DNA测序时,两者所得的序列是否应该一致的?谢谢!bigbang_0_0 不是完全一致的,肿瘤细胞存在基因组不稳定的特点,易积累体细胞突变。而血液细胞多由造血干细胞分化得来,除非造血干细胞本身发生癌变,其基因组应该与胚胎时期的基因组是一致的。cssc 谢谢啊,感谢帮助!华因康基因公司 有些基因是是存在体细胞突变的,这些体细胞突变一般发生在肿瘤细胞中,所以肿瘤组织中突变比 ...

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【求助】Feulgen染色法的具体解释是什么?

drink51 大家好,最近遇到一个很是头疼的问题。Feulgen染色法是什么东东?在网上搜了很多资料,但是解释都不是很好。今天突发奇想,到我们丁香园来求助,希望能够得到满意的答案。黄立坤 这是我在资源网站上http://goo.gl/9WJmO看到的,上传人是徐若雨,找了半天才解决你这个问题。Feulgen染色法:1924年建立,对DNA进行特异性染色基本原理:细胞中的DNA在60℃时用1mol/L HCI会解离脱氧核糖核酸,使 ...

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【讨论】从无人问津到淘金热–微RNA研究简史zz

otherwise http://azaleasays.com/2009/09/06/brief-history-of-microrna-research/从无人问津到淘金热–微RNA研究简史Posted onSeptember 6, 2009 by azalea今天师兄Charles推荐了2008年Lasker Basic Medical Research Award得主之一VictorAmbros的一篇文章:Ambros,V. (2008). The evolut ...

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