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手把手课程之 IHC 关键操作步骤

本文重点讲述 IHC 操作流程中的关键步骤,并提供数据以支持及解释 CST 在实验过程中所提的建议。最后,本指南列出了 CST 科学家内部常用且最适用于与抗体配套使用的 IHC 试剂。抗原修复—热诱导的抗原表位修复 (HIER)缓冲液适用于 HIER 的缓冲液有多种。而 CST 常推荐的两种缓冲液是:pH6, 10 mM 柠檬酸盐缓冲液和 pH 8, 1 mM EDTA 缓冲液。缓冲液是否适用于您的实验取决于您所使用的一抗。请查阅产品说明书中所推荐的用于特异性抗体的修复缓冲液。一般而言,EDTA 缓冲 ...

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毒、热、辣:Nanodisc 配合冷冻电镜提升膜蛋白的分辨率

Toxic, hot, and spicy: Nanodiscs improve membrane protein resolution in cryo-EM毒、热、辣:Nanodisc配合冷冻电镜提升膜蛋白的分辨率(作者:Cube Biotech) Nanodisc结合冷冻电镜应用时,Nanodisc提升了通过冷冻电镜对膜蛋白的解析率,同时揭示了功能性磷脂所扮演的重要角色。The last few years have seen a tremendous increase in high-res ...

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如何快速找到实验 Protocol?

每当要搞从未做过的实验时,总会抓狂,到哪找 Protocol 呢?别急,下面让我们一起开启寻找 protocol 之旅。一.搜索引擎不过多解释,想要在网上找东西,就靠 Google。在此给出一点建议:多用 Google.com,多搜英文关键词。推荐搜索引擎:Google.com, Bing.com二.权威 Protocol 网站网上有许多专门以 protocol 为主的网站,现举例最有名的:1. Nature Protocol重点推荐「Discussion Forum」「To ...

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如何有效提高转染效率

1.转染技术介绍近几年,转基因研究已经成为分子生物学领域的研究热点,范围已经渗透到医学,农业等多个领域。在转基因动物的制备过程中需要经历基因克隆、细胞转染、胚胎移植等几个步骤,而细胞转染技术则是此过程中的重要环节。细胞转染技术是采用一定的方法和途径将外源核酸分子如 DNA、RNA 等导入特定的细胞并表达目的基因,产生特定功能的蛋白质分子。在生产转基因动物的研究中,通过结合细胞转染技术与体细胞克隆技术培育转基因动物是一 ...

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蛋白互作研究技术:「FRET」VS「Duolink PLA」

荧光能量共振转移 (FRET)检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。原理当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时,就会发生一种非放射性的能量转移,即 FRET 现象,使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多(荧光猝灭),而受体发射的荧光却大大增强(敏化荧光)。应用1、生物大分子结构和功能研究:细胞膜 ...

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这是一款高效看文献的神器

对于科研狗的我来说,文献是每日必备、实验是每日必备、陪男朋友是每日必备、甚至点拨点拨师弟师妹也成了每日必备……然而,我每天只有 24 小时啊,看不完的文献,做不完的实验,毕不了的业。后来,我发现在工作量一定的情况下,我必须提高工作效率。各种「科研神器」「实验技巧」成了我的生活必备。今天和大家安利的是一款实现文献图文一页,快速阅读文献的小软件。以前, 我是这样看文献的科研狗的你,对于这样的情景应该很熟悉吧。下图左边是 Fig3 对应的文字描述 ...

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这些抗体制备问题是你最关心的吗?

抗体制备是免疫学研究的基础。制备一个合适的抗体将会决定着免疫实验的成败。抗体制备过程涉及到很多个方面,比如免疫原如何设计、免疫过程的优化、目的抗体筛选、抗体纯化、应用鉴定等。接下来我们将会对一些关键的技术难点进行解答。1. 免疫原是如何设计的?有什么原则?解答:免疫原可以是天然蛋白也可以是重组蛋白,甚至是多肽、DNA,所以免疫原的设计主要从两个方面考虑:免疫原分子的特点抗体应用。结合免疫原分子的特点,抗体的应用可以提供 ...

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如何博得审稿人芳心,顺利通过外审?

「叮」的一声,一封邮件不期而至。打开一看,历时近 2 个月的外审结果终于回来了,迅速浏览一下邮件,得到两个信息:1. 这是一个 Major revision;2. 修改意见很详实,4 个 General comments,21 个 Specific comments。默默告诉自己,沉下心来好好干,希望很大,最终返修回去一周即录用。面对审稿人挑剔的目光,我们该怎么做,才能顺利通过外审呢?一. 态度态度很重要。历经千辛万苦完成一篇论文,易稿几十次,投稿被拒数次,自信心重度被创, ...

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让你事半功倍的 PDF 小技能

一.PDF 转为 Word有时,大家需要将一个 PDF 文档转为 Word 文档,首先我们就来学习如何将 PDF 转为 Word 。至于如何将 Word 转为 PDF,只要用 Word 2010 及以上版本打开后另存为 PDF 即可。如果安装了 Adobe Acrobat,也可用虚拟打印机打印成 PDF。OK,回归主题,我们用 Acrobat 打开一个 PDF 文档。然后,「文件」→「另存为」→「Microsoft Word」→「Word 文档或 Word 97-2003 文档」。就这么简单,等待软件将 PDF 转换为 Word 吧。我们来看看效果:看,基本 ...

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手把手教你用 PS 和 AI 做出漂亮的 WB 结果图

在科研生活中,我们不可避免地会遇到整理数据这一环节。作为生物学研究生,常见的数据不外乎 Western Blot 图片、统计图表、照片、模式图等,文献中那种一个里面有 A, B, C, D 等多个图片的 Fig,就是经过排版的 Fig。虽然我们也可以用 PPT 制作 Fig,但是这样制作出来的 Fig 只适用于做工作汇报,不适于投稿。在这我们将使用 PS 和 AI 来制作 Fig,其中 PS 主要用于修改图片的对比度,裁剪图片,在不改变图片数据的情况下去除图片的杂物,使图片变得更加漂亮;AI 主要用于排版图 ...

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读博之前,别人不会告诉你的 10 个经验

以下这 10 点建议,师兄师姐可不会告诉你哦,这是德克萨斯州立大学一位教授给的建议。具体大家往下看。1. 沉浸在写作中,学习如何写资助方案也许你会说,这不是读完博士后该做的嘛,其实不是。写资助方案和你写论文或是典型的期刊文章差不多,但是各种资助方案会让你在读博期间就有经费支持。你找工作的时候,这个经历也是你简历上最好最吸引人的内容。2. 找一个强大的导师这点实在是太重要了,好的导师既要是一个好的科学家,也要是一个好的导师。他们能 ...

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献给初学者:流式细胞术,你会处理样本么?

流式细胞术「Flow Cytometry,FCM」能够快速测定细胞悬液中单个细胞的生物学性质,并可以对特定的细胞进行分选收集。广泛用于细胞生物学,免疫学,遗传学,基础医学等领域。接下来的 Protocol 中以小鼠的淋巴细胞为例进行细胞表面和胞内染色。一. 试剂准备Wash Buffer:PBS+1% FBS破膜剂「ICS」:用双蒸水配置 10 % Saponin「Sigma」。破膜固定剂:将配好的 ICS 用 4% 多聚甲醛稀释 100 倍ICS Wash Buffer:将配好的 ICS 用 W ...

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在生物公司做技术支持是一种什么样的体验?

又到毕业季,师妹师弟又是一番躁动。虽说已经拿到生物公司产品工程师的 offer,但是却不知道这产品工程师到底是干啥的。鉴于最近经常接到师弟师妹的咨询,所以我决定给大家写写自己在高通量测序公司做技术支持的体验。1技术支持?产品工程师?俗名,技术支持;官方,产品工程师。2对专业有要求吗?部门 12 个人,12 个专业。有养牛的、养鱼的、养鳖的、养老鼠的、做微生物的、食品安全的、种番茄的、种水稻的……专业没有绝对限定,但是至少是生物背景。因为平 ...

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献给初学者:手把手教你在线预测蛋白质结构

蛋白质是生命活动的体现者,其结构决定着功能。由线性氨基酸组成的蛋白质需要折叠成特定的空间结构才具有相应的生理活性和生物学功能。解析蛋白质的空间结构对于认识蛋白质的功能、功能的执行、生物大分子间的相互作用,以及医学和药学的发展「如药物靶点的设计等」具有重要意义。为了更快速地了解蛋白质功能,不能只等待蛋白质的测定结果,尤其是对未知蛋白质开展研究之前,通过对蛋白质结构进行预测具有明显的优势。 理论基础蛋白质的高级结构由 ...

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免费好用的文献管理软件送给你——Mendeley

面对数量众多的文献,也许你还不知道如何管理,也许你还在为下不到 Endnote 而发愁,今天我来给大家安利一款免费又好用的科研文献管理神器—Mendeley。Mendeley 是由三个德国的博士搞出来的神器,它非常适合大家使用。好了,闲言少叙,直接上干货。首先怎么下载呢?既然推荐的是免费软件,那自然是上百度,在度娘上搜索 Mendeley,出现以下界面:点击进入即可,之后下滑找到下载选项,直接点击 Download now。然后进入下一个 ...

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研究生写英文综述到底有多难?小司机带带你

近日收到邮件,我的一篇英文综述终于被接收。从写作到发表,历时约一年半,IF 大概 3 点多。虽然影响因子不高,但是于我而言,这篇文章意义非凡, 因为这篇综述从选题、构思、写作到选刊、投稿、修回都由我一人独挑大梁,特别有成就感。作为一枚算是独立发过英文综述的小司机,我感触良多,在此将英文综述的写作及投稿策略与大家分享一下,希望各位有志于写作英文综述的同学少走一些弯路。◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 首先我们说说对英文综述来说很重要的一点——时机,其中包括时间和机遇,这 ...

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【视频】小鼠尾静脉注射

小鼠尾静脉注射相比大鼠要困难的多,特别是 c57 这种小黑鼠,尾部血管不容易看清,需要多加练习,华联科动物实验平台将一些小的技巧分享给大家。(文章后附有视频教程)01 固定小鼠固定装置,可买小鼠专用固定器,也可以自己 DIY, 小编自己 D 了一个蛮好用哈,方便实惠。见图:方法:用 50 ml 离心管二端,中间要开洞,用钻头或是刀片都可以,底部用 10 ml 注射器内芯固定好,这样小鼠怎么动都不会晃动,如果 20 g 以下小鼠可以在里面加一小端泡沫。02 尾静脉的准备与选择c57 小鼠尾 ...

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腺相关病毒(AAV)在动物实验中的应用

腺相关病毒属于微小病毒科(parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒,基因组大小约4.7kb.腺相关病毒可利用病毒载体将外源基因转入动物组织和细胞中,具有安全性高、免疫原性低、宿主范围广、表达稳定等多种优点,广泛应用于动物体内研究。腺相关病毒血清型众多(12种),不同血清型对不同组织亲和性不同,因此在具体科学研究中,以下问题往往困扰着广大科研工作者:选择何种血清型?如何注射?注射多少病毒?注射部位如何选择?注射多 ...

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CRISPR/Cas9 抗体最新发布

要说近两年生物医药领域最火的两个词,那绝对是 CRISPR/Cas9 和 CAR-T,并且可以预见未来几年它们将继续吸引我们的眼球。2012 年才首次报道 CRISPR/Cas9 可用于基因编辑,到 2015 年开始风靡全球,它的发展速度令世界瞩目。基因编辑能够对基因进行精确操作,并且以高效率、低成本的优势实现基因定点删除,突变,敲入等。 目前 CRISPR/Cas9 的主要应用领域是基因敲除,在基础研究领域已经展现出强大的优势,但是在临床应用中,由于潜在的 ...

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自噬反应关键蛋白 Atg12 靶点蛋白抗体的开发应用

自体吞噬是细胞中一种降解和再生细胞组分的基本细胞过程,词语「autophagy」源自希腊词语「auto-」和吞噬(phagein),前者意思是「自我」(self),而后者的意思则是「去吃」,而自噬表示的就是「自己把自己吃掉」(self eating);自体吞噬这种概念是 20 世纪 60 年代提出来的,当时科学家们首次观察到细胞能够通过将自身内容物裹入到膜结构中来破坏内容物,从而形成袋装的囊泡结构,这种囊泡结构能够被运输到再循环小泡结构中进 ...

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