做感受态的小女孩

做感受态的小女孩

刚进实验室，师兄就神秘兮兮的对我说，「小师妹啊，师兄我最近要做一项非常伟大的研究，非常需要你的协助。」

我：「（星星眼）好哇，要我做什么？」

师兄：「听好了啊，师兄我要将扩增好的启动子序列重组到载体中，再将这个重组 DNA 分子导入细菌体内进行表达喔，是不是非常伟大？」

我：「（继续星星眼）嗯嗯」

师兄：「这个艰巨的任务现在就交给你啦，很简单的，你先做个感受态出来，再将我构建的质粒转进去就好了。"

我：「..........（感受态是什么鬼，能吃吗？）」

感受态小科普

野生型的细菌由于能产生一种酶，可以迅速降解进入的外源 DNA，所以并不容易转化。而所谓的感受态，就是指受体最易接受外源 DNA 片段并实现其转化的一种生理状态，受受体的遗传性状、菌龄、外界环境因子的影响。

受体细胞经过一些特殊方法 (如：电击法、CaCl2 等化学试剂法) 处理后, 使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过的感受态细胞。进入细胞的 DNA 分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。

听说大肠杆菌转化常用的是化学法 ( CaCl2 法），我赶紧在网上下载了 protocol，检查了一下实验室现有的试剂和设备，开动试验！

首先将 -70℃ 甘油保存的菌种取出来，用划线法接种细菌于培养皿，37℃ 培养过夜。

第二天，挑取单克隆，接种至 5 ml LB 培养液中，37℃ 震荡培养过夜。

第三天，取 1 ml 菌液接种至 100 ml LB 培养基中，37℃ 震荡培养约 2~3 小时（200~300r/min）。

将培养瓶取出，放置冰上 10-15 分钟。4℃ 离心（4000 g）10 分钟。

弃上清，将离心管倒置于干滤纸上 1 min，吸干残留的培养液。加 10 ml 0.1M 的 CaCl2 到离心管中，振荡混匀，悬浮菌体，冰浴 30 分钟。4℃ 离心（4000 g）10 分钟，弃上清，将管倒置于干滤纸上 1 min，吸干残留的培养液。

加 4 ml 冰预冷的 0.1M 的 CaCl2，重悬浮菌体。每管 0.2 ml 分装，至 -80℃ 保存备

涂板，长斑，赶紧报告师兄。

师兄：「额，这是什么斑，师妹，这里面准是染上杂菌了吧。整个操作过程都要在无菌条件下进行，所有的器材包括水都要经过高压灭菌的，要不你再试试？」

重新紫外杀菌，高压灭菌后，继续划线摇菌，加 CaCl2，分装

涂板，没长斑，赶紧报告师兄。

师兄：「淡定，测了 OD 值没，是多少？」

我：「啊？什么 OD 值？」

师兄：「......」

重复划线摇菌，测 OD600，0.8。

师兄：「过了，不超过 0.5，已经对数期。没事啊，再做一遍，你一定行的。」

划线摇菌，测 OD，还好在 0.3 左右，离心，加 CaCl2，分装。

赶紧涂板，没长斑。

师兄：「额，师妹，要不我们从难度低一点的实验做起？先去跑个 PCR 怎么样？」

我：「那你的的伟大研究怎么办？"

师兄：「没事，听说诺唯赞的感受态转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA，而且他们家细胞口碑不错价格也可以接受，就用他们家的吧！」

我：「好啊好啊，师兄你真好！」

我：「老板，师兄说买个感受态。」

感受态细胞制备不易，且用且珍惜！

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