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质粒 DNA 琼脂糖凝胶电泳定量及定量检测

通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极移动。在一定的电场强度下,DAN的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不 ...

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质粒DNA 的提取

通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入Ph4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起 ...

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大肠杆菌感受态制备

通过本实验掌握大肠杆菌感受态细胞的制备。细菌处于易于吸收外源DNA的状态叫感受态。细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面,经42℃段时间短时间热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。1.超净工作台2.低温离心机3.恒温摇床4.高压灭菌锅5.恒温水浴锅6.培养皿(二)材料与试剂1.细菌:DH52.100mmol/LCaCl2(灭菌)3.LB培养基 ...

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分子生物学实验所用物品清单

以下物品每组(两人)一套:枪头盒1000ul1个/组枪头盒200ul1个/组小烧杯2个/组三角瓶2个/组培养皿2个/组双面板1个/组记号笔1只/组移液器1000ul1只/组移液器200ul1只/组移液器20ul1只/组以下物品每两组(四人)一套:移液器0.2ul1只/2组枪架1个/2组研钵1个/2组标签纸1张/2组枪头盒10ul1个/2组镊子1个/2组剪刀1个/2组量筒(10ml)1个/2组量筒(50ml)1个/2组核对无误后 ...

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RNA提取试剂的选择

RNA提取对于科研人员来说并不陌生,但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上,现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要,为什么往往提取的RNA却容易失败呢?RNA提取失败的主要现象有三个:提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢?首先,要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分,但提取的材料仍需谨慎处 ...

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Western Blot常见问题总结

WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与或标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。关于WesternBlot技术,我们实验 ...

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为超高效合相色谱(UPC2)分析选择合适的进样溶剂

Jacob N. Fairchild目的使用ACQUITY UPC2TM系统进行分离时,根据分析物和固定相性质选择合适的进样溶剂,并提供通用性指导。背景在进行UPC2®方法开发时,进样溶剂的影响是一个极其重要的考虑因素。首先,样品必须能够溶解在与流动相相溶的溶剂中。一般而言,如果样品可以溶解在甲醇(最多含有百分之几的水)或其它有任何机溶剂中,就可以用超临界CO2进行分析,尽管某些溶剂会对色谱柱产生不良影响。此前,我们曾在2- ...

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Echo MRI在肥胖与青春期发育神经调控研究中的应用

EchoMRI在肥胖与青春期发育神经调控研究中的应用LeptinSignalinginKiss1NeuronsArisesafterPubertalDevelopment背景:来源于脂肪细胞的瘦素在人类和小鼠的青春期发育中起着重要作用,联系着能量存储和青春期发育的开始。研究表明瘦素通过弓状核中表达kisspeptin的神经细胞来发挥调节作用。本文进一步研究了瘦素单独作用于Kiss1细胞能否启动小鼠青春 ...

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一种新型化合物能够遏制多种病毒增殖

迄今为止,抗病毒药物都是以病毒为目标,而京都大学研究生院的一个研究小组9日宣布,他们开发出一种新型化合物,通过遏制病毒宿主体内的酶发挥作用,成功遏制了多种病毒的增殖。这种化合物不仅副作用的风险很小,而且对于抗药性病毒也具有效果,有望作为一种新的抗病毒药物使用。京都大学研究生院教授萩原正敏率领的研究小组注意到,病毒在侵入人体进行增殖时,需要利用人和实验鼠等哺乳类细胞内产生的一种称为"CDK9"的酶。为了遏制CDK ...

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细胞传代的一般方法

开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全:一般主要有:细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)、7.5%NaHC03 溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS 洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1)、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰 ...

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如何申请国家级科研课题设计

科研课题设计主要分四个层次。国家和各部门分不同层次,开辟了许多资助科研课题的渠道,其中与医药卫生关系比较密切有下列几种。莱博医学编译为您讲解一下国家级科研课题。国家级科研课题设计渠道(1)国家医学科技攻关项目:国家科技攻关项目是国家经济建设的组成部分,每5年为一阶段,如“八五”科技攻关计划,“九五”科技攻关计划。其中医学部门为国家医学科技攻关计划,由卫生部主持实施,分解出课题或子课题、招标范围、招标内容,面向社会公开 ...

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产品商标你有吗

有产品,就应有商标,甚至于先有设商标,再开发产品。但是在我们实验室设备及试剂行业里面,国内的很多公司对商标不是很重视。北京德元国际科技有限公司有多个商标注册经验,在这里分享给大家。为什么要注册商标?商标使用人一旦获准商标注册,就标志着它获得了该商标的专用权,并受到法律的保护。未注册的商标有4大弱点:1、企业使用的商标如果不经过注册,商标使用人对该商标不享有商标专用权。就是说你使用这个商标,别人也可以使用这个商标,这 ...

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头孢地尼药品中杂质快速自动鉴定方法

头孢地尼(Cefdinir)属第3代头孢,日本藤泽药品工业公司原研,1991年首次在日本上市,商品名Cefzon。1997年12月在美国上市,2001年国产头孢地尼获准在中国上市。该品具有抗菌谱广、抗菌作用强、临床疗效高、毒性低、过敏反应少、方便使用等特点。近年来,国内已准备开发其仿制药。但如今基于药品安全的考虑,仿制药中的有关物质的检测越发引起注意,中国药典上也明确规定,药物中杂质含量高于0.1%的所有杂质均需对其杂质结构进行鉴别(毒性药物限度则更低)。所以,如何高效快速地测定药物中的杂质,这一课题逐渐成为药物研究过程中亟待解决的难题。

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体视显微镜荧光适配器-让您的体视显微镜具备荧光观测功能

下图为microscopetoday杂志封面图片,即是通过改造体视显微镜后拍摄的荧光照片,可见效果很好。该期12-17对NIGHTSEA的这一体视显微镜荧光观测升级装置有详细的介绍,如果感兴趣可自行下载。一个NIGHTSEAStereoMicroscopeFluorescenceAdapter(体视显微镜荧光适配器系统)包中含有使你现有体视显微镜升级为荧光显微镜的所有装置。适配器有五种激发光/发射光组合(外 ...

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尿液中的“浴盐”化合物的法医毒理学分析方法

合成卡西酮是化学品卡西酮的类似物,它们常作为“浴盐”在市场上出售。卡西酮天然存在于卡塔叶植物(阿拉伯茶)中。这一类药物是中枢神经系统兴奋剂,其药效可模拟安非他命、甲基苯丙胺、可卡因和哌醋甲酯等药物。虽然这类药物通常被注明“不适于人类使用”,但在过去几年里它们在人群中的接受和使用程度有着明显增长1。此外,人们正在通过修饰现有卡西酮结构不断开发并推广新药,以规避为特定化合物设定的药物滥用法规。本应用纪要详细介绍了一种成功提取和分析人体尿液样品中多种代表性合成卡西酮的法医毒理学方法。通过使用混合型固相萃取(SPE),再进行UPLC/MS/MS分析,由10种合成卡西酮组成的一组化合物被成功提取,并获得了高回收率和分析灵敏度。所有化合物的基质效应都很小,并且校准曲线在1至500 ng/mL范围内呈线性。对上述各类药物的分析使得此方法能够拓展于新开发的相关化合物,必要时也可对该方法作出适当的调整。

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RTCA技术在肿瘤学中的应用(一) ——RTCA实时监测肿瘤细胞迁移及浸润

细胞的迁移和浸润不仅是细胞进行重要生理活动的基础,同时也在炎症反应和肿瘤发生发展等病理过程中发挥着关键的作用。细胞迁移及浸润是肿瘤细胞的主要特性之一,因此其也成为目前细胞生物学研究的热点。目前对细胞迁移及浸润研究的检测方法通常是建立在标记基础上的终点检测法,其中一种最常用的检测方法为BoydenChamber法,又称Transwell技术,通过将细胞加入上孔室,在下孔室加入血清或其他趋化因子诱导细胞迁移到 ...

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流式荧光技术引领肿瘤标志物联合检测进入高通量时代

肿瘤标志物在肿瘤的临床诊断和治疗中占有重要地位,通过对血液或体液中肿瘤标志物存在或含量的检测,不仅可用于肿瘤的普查、早期诊断、辅助诊断、良恶性鉴别和临床分期,同时对监测疗效、判断预后、预测肿瘤的复发和转移也具有重要价值。临床上由于大部分单个肿瘤标志物敏感性或特异性偏低(一种肿瘤可以分泌多种肿瘤标志物,而不同的肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型可有相同的肿瘤标志物),而且在不同的肿瘤患者体内,肿瘤标志物的质和量变化也较 ...

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应用荧光素酶-ATP法检测活性污泥的生物活性

简介:众所周知,活性污泥工业的处理效率与污泥微生物的活性密切相关。微生物活性越大,处理效果就越好;反之,效果就越差。通常我们使用混合液悬浮固体浓度(MLSS)、混合液挥发悬浮固体浓度(MLVSS)、污泥沉降比(SV)、污泥容积指数(SVI) 、污泥龄(TS) 等指标来衡量微生物活性,并以F/M的形式进行评述。随着研究的深入及测量技术的进步,人们发现用MLSS(或MLVSS) 来衡量活性污泥中微生物的活性不够确切,因为MLSS(或MLVS ...

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基因芯片检测HLA-undefined27

强直性脊柱炎(AS)是一种以脊柱为主要病变的慢性自身免疫性疾病,该病的发展会造成不同程度的骨骼、肌肉、眼、肺病变。虽然这是一种很古老的疾病,几千年前古埃及人的骨骼中就发现有强直性脊柱炎的证据,在2000年以前希腊名医希波克拉底就对此病进行了描述,但其病因和致病机理却至今尚未阐明。但在众多病因研究结果中,遗传基因HLA-undefined27是最受公认的诱因,它与AS的相关性早在40年前就被认识到了。因此检测该基因的携带情况对A ...

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InSphero 3D微组织—带给你新药测试新发现

InSphero是通过类器官式3D微组织培养(supplieroforganotypic,biologicalinvitro3Dmicrotissues)开展新药测试的领军型开发商。当前全世界最知名的前十家药物和护肤品制造商产品测试都使用到InSphero的专利微组织技术。InSphero3DInsight™微组织用于化学品应用的效能和毒理体外测试,包括长期效应和炎症介导的毒性效应。开发有可供选择的多种肿 ...

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