B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）的检查直接免疫荧光法

丁香园2014-07-31

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一、实验原理

SmIg是B细胞的抗原识别受体，也是B细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B淋巴细胞。

二、实验材料

1. ICR小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）

2. 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig抗体（购自BD公司）

3. Hank's液：pH7.4(内含0.1%NaN3)

4. 台式离心机

5. 离心管、吸管、移液管等

三、实验方法

1．采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6ml Hank's液的平皿中，用100目钢网研磨，混匀。从中吸取1ml细胞悬液放入一试管中，加满Hank's液，离心1000rpm，10分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1ml

容积，即为约1×10/ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1×107/ml的细胞悬液0.4ml加Hank's液3.6ml，即为1×106/ml的细胞悬液。

2．取2ml离心管两只，各加入1×106/ml的细胞悬液1ml，用台式离心机离心2000rpm，3分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100µl，另一支不加抗体作对照，置4℃冰箱30分钟。

3．取出离心管，用Hank's液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。

四、实验结果

荧光显微镜观察，落射激发光下SmIg阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数，共计数200～300个淋巴细胞，算出其中SmIg阳性细胞的百分数。

五、注意事项

在滴片前要彻底去除游离的抗体，以避免假阳性结果。

B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）的检查 直接免疫荧光法