一、准备与开机 　　1．打开主机箱门，在进样阀和检测器间安装合适的色谱柱。 　　2．打开计算机电源开关，打开LC电源开关。 　　3．打开柱箱电源开关，设定分析温度。 　　4．双击计算机桌面上的Instrumentonline图标进入工作站系统。 　　二、编辑LC分析方法 　　1．在Instrumentonline主界面上选择Method→EditEntireMethod。 　　2．根据提示编辑完所有的LC参数。设定合适的泵流量和检测器波长。 　　3．保存所编辑的方法。 　　三、样品分析与采集数据 　　1．在Method&Runcontrol界面上选择File→Load→Method，选择分析方法文件。 　　2．在Method&Runcontrol界面上选择Runcontrol→Samplelnfomation，依提示输入保存路径、文件名称、样品名称、操作者等信息，进样后即自动开始样品分析与数据采集。 　　四、报告输出 　　1．在Instrumentonline主界面上选择View→DataAnalysis，

一、操作规程 　　、开机： 　　检查溶剂瓶里是否装有溶剂；依次把真空脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱及所需用检测器的电源打开，让各模块自检；打开电脑开关，进入“HPchemstationonline”状态，在电脑中确认各模块型号，确认后在HPLC软件中依次把进样器，柱温箱，泵及检测器的开关打开(注意：泵的流速在始运行时不能太大；泵需排气。) 　　、样品的测试： 　　前处理后的样品在“HPLC”软件中编辑相应测试方法(各参数设置)①、泵参数设置②、进样口参数设置③、柱温箱参数设置④、检测器参数设置⑤、确认所设定的测试方法后进行“save”；编辑“sequence”，确认后“save”；运行“sequence”：①、对标准样品测试，得到保留时间及峰面积，并进行标准曲线绘制；②、对经前处理后的待测样品测试，同样得到保留时间和峰面积，利用标准曲线，从而计算出待测样品物质的组份及含量；报告打印。 　　、关机 　　首先把泵的流速降低；在“HPLC”软件中依次把1100系列各模块的开关关闭，逐步退出“HPLC”软件，关闭电脑电源；依次把各模块的电源关闭。 　

摘要二维柱色谱系统是近年来迅速发展的新型色谱方法，柱效与主要影响因素的关系难以用传统方法建立定量模型。本文采用基于变步长BP算法的人工神经网络，对高效微填充柱──毛细管柱构成的二维柱色谱系统建立了柱效与影响因素的权接拓朴模型，并用于柱效预测和操作条件优化中，取得了较好的效果。 　　1、前言 　　现代气相色谱已广泛采用了毛细管柱，毛细管柱的分离效能高但柱容量低，直接进样极易造成进样过量，柱管也易被样品中的高沸点组分玷污。因此，比较理想的方法是在毛细和柱前串接一支短填充柱，构成二维柱色谱系统。由于二维柱色谱便于实现中心切割、溶剂切割、反吹等切换操作，有利于痕量杂质的测定、有利于保护主柱，并且可简化样品的预处理过程，故近年来这种新型的色谱方法发展十分迅速。 　　自八十年代起，中科院大连化物所国家色谱研究分析中心对二维柱色谱进行了大量研究工作，卢佩章院士开创性地提出了微填充柱──毛细管柱直接连接的新型系统。根据这一思想，国振双等以美国PE公司SIGMAI气相色谱仪为基础，在原汽化室中安装了自行研制的高效微填充预柱与石英毛细管柱直接相连接，将一维柱色谱改装为二维柱色谱系统

　　1、引言 　　聚乙二醇二甲醚，系一种优良的气体净化剂，越来越多地用于合成气及天然气中硫化氢，二氧化碳等杂质的去除。南京化学工业公司于1984年成功地开发了基于该溶剂的气体净化技术，并首先在国内化肥行业大力推广。作为气体净化溶剂，其平均分子量和分布特征是非常重要的质量指标。化学端基分析方法不能得到分布信息因而难以满足工业控制的需要。本文介绍了一种气相色谱(GC)分析方法及其在合成工艺改进中的应用。 　　2、实验部分 　　2.1 仪器和条件3420气相色谱仪附FID检测器(北京分析仪器厂)，HP3394积分仪(惠普公司)，实验室自改装柱上进样器，氢气为载气，进样温度290℃，检测器温度280℃。22m×0.53mmID。交联FFAP大口径FSOT柱，最高使用温度250℃(兰州化学物理研究所)。生产线上直接采样，用微量注射器取0.1μL直接进样进行GC分析。 　　2.2 定性和定量利用部分标准和同系物保留规律定性，有效碳数响应规则定量。 　　3、结果与讨论 　　3.1 聚乙二醇的合成聚乙二醇作为中间合成产物，其平均分子量及分布将决定甲基封端产物的分子分布特征，

(1)按两相状态分类：以流动相状态为标准划分类型。用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法Gaschromatography(GC)；用液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法LiquidchromatographyLC. 　　(2)按样品组分在两相间的分离机理分类：利用组分在流动相和固定相之间的分离原理不同而命名的分类方法。包括，吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、凝胶渗透色谱法、离子色谱法和超临界流体色谱法等十余种方法。 　　(3)按色谱技术分类：为提高组分的分离效能和高选择性，采取了许多技术措施，根据这些色谱技术的性质不同而形成的色谱分类法。例如，程序升温气相色谱法、反应气相色谱法、裂解气相色谱法、顶空气相色谱法、毛细管气相色谱法、多维气相色谱法、制备色谱法等七种方法。 　　(4)按固定相存在形态分类：根据固定相在色谱分离系统中存在的形状，可分为柱色谱法（其中又含填充柱色谱法和开管柱色谱法）、平面色谱法（其中又含纸色谱法和薄层色谱法）等九种方法。 　　(5)按色谱动力学分类：根据流动相洗脱的动力学过程不同而进行分类的色谱法，例如，冲洗色谱法、

①对于组分含量较多及沸程较宽的样品，采用恒温的结果会不理想。若选择某一柱温条件，对样品中低沸点化合物分离较好，那么高沸点组分的馏出时间很长，而且峰扩展严重，有时甚至不能出峰。若选择高沸点的柱温条件，那么样品中低沸点组分会很快出峰而得不到良好的分离。 　　事实上，所有化合物都有都有最佳分离温度。在程序升温分析中，柱箱温度逐渐升高，这就使样品中各组分在其理想温度下出峰并得到良好分离。 　　程序升温气相色谱法[ProgrammedTemperatureGasChromatography(PTGC)]或[TemperatureProgrammingGasChromatography(TPGC)]是不同于恒温气相色谱法[IsothermalGasChromatograpjy(IGC)]的一项重要气相色谱法，它的操作特点是在一次样品分析的时间周期内，柱温随分析时间的延长呈现线性或非线性升高，使样品中的各个组分实现完全的分离。要做到最佳程序升温，须做到： 　　a.设置的初始温度应使样品中所有低沸点组分得到良好分离。 　　b.设置的终点温度应使样品中的最后出峰组分（最高沸点

假尿嘧啶核苷（Pseudouridine，PD）简称假尿苷，是一种修饰核苷。它作为肿瘤标记物对肺癌、乳腺癌和肝癌等恶性肿瘤的诊断、监测和疗效评估具有指导意义。本文采用反相高效液相色谱法（HPLC）测定尿假尿苷和肌酐(UR)，旨在探讨它对妇科恶性肿瘤，尤其是卵巢癌的应用价值。 　　1、材料与方法 　　1.1 实验对象 　　对照组：我院自愿健康的女性医护人员20例，年龄平均45岁。实验组：1)子宫肌瘤患者21例，年龄平均46岁；2)良性卵巢肿瘤患者23例，年龄平均43岁；3)妇科恶性肿瘤患者27例，年龄平均54岁，其中卵巢癌14例，宫体癌8例，宫颈癌2例，外阴癌2例和输卵管癌1例。所有诊断均经术后组织病理学证实。 　　1.2 标本采集和处理 　　收集四组患者术前的空腹晨尿10ml，另从27例恶性肿瘤患者中随机抽取14例术后2周留取空腹晨尿10ml，－32℃低温保存，分析前置室温融化。尿假尿苷浓度用肌酐校正，表示为nmol/μmol肌酐。 　　2、结果 　　正常对照妇女组尿PD/UR的测值平均为6.18±1.57nmol/μmol肌酐(X±s)，参考T

　　来源：仪器网 　　现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。图8-1是具有基本配置的液相色谱仪的工作流程图。 　　液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。图8-1是具有基本配置的液相色谱仪工作流程图： 　　进样器 　　从液相色谱仪工作流程图看出，进样器是将样品溶液准确送入色谱柱的装置，分手动和自动两种方式。 　　进样器要求密封性好，死体积小，重复性好，进样时引起色谱系统的压力和流量波动要很小。现在的液相色谱仪所采用的手动进样器几乎都是耐高压、重复性好和操作方便的六通阀进样器，其原理与气相色谱中所介绍的相同。

　　来源：上海市计算技术研究所-色谱仪器事业部 　　色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 　　吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。 　　分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。 　　离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不同而使组分分离。常用的有不同强度的阳、阴离子交换树脂，流动相一般为水或含有有机溶剂的缓冲液。 　　排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或有机溶剂为流动相。 　　色谱法的分离方法，有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。色谱所用溶剂

　　来源：仪器网 　　气相色谱法简介 　　气相色谱法是根据气-固、气-液、气-液-固之间的相平衡，借溶质分配系数的不同而进行分离的方法。建立相平衡的“界面”最好是无穷大，气相色谱法能满足在这个极大的表面上瞬间建立相平衡的条件。 　　由于一般用惰性气体作载气，故可认为溶质和载气分子之间基本上没有相互作用。为减少色谱柱中的纵向扩散，流动相最好用分子量大的载气。另外，还存在一个使理论塔板高度（H）最小的最佳线性流速。但气相色谱法在选择色谱柱时基本上可以忽略这些。研究固定相液体、载体表面、吸附剂以及溶质在液相中或固体表面上的分子间相互作用，才是选择色谱柱的必要事项。 　　哪些样品可以作为分析对象 　　分析样品的物性（如沸点、官能团、反应性、溶解的溶剂系统等）与选择气相色谱的分离条件密切相关。 　　保留体积（Vg）与样品沸点（TB）之间的关系： 　　式中：M1―液相的分子量，γ―溶质的活度系数（同系物溶质的γ基本相同，则保留体积的对数与TB成直线关系），T―色谱柱温。 　　（1）溶质之间沸点相差20℃时：容易用标准色谱柱分离； 　　（2）溶质之间沸点相差1

　　来源：上海市计算技术研究所-色谱仪器事业部 　　一、尾吹气的使用 　　尾吹气是从色谱柱出口直接进入检测器的一路气体，又叫补充气或辅助气。填充柱不用尾吹气，而毛细管大多采用尾吹气。这是因为毛细管柱内载气流量太低（常规为1~3ml/min），不能满足检测器的最佳操作条件（一般检测器要求20ml/min的载气流量）。在色谱柱后增加一路载气直接进入检测器，就可保证检测器在高灵敏度状态下工作。尾吹气的另一个重要作用是消除检测器的死体积的柱外效应。经分离的化合物流出色谱柱后，可能由于管道体积的增大而出现体积膨胀，导致流速缓慢，从而引起谱带展宽。加入尾吹气后就消除了这一现象。 　　那么，尾吹气流量究竟多少合适呢？这要看所用检测器和色谱柱的尺寸而定。比如，用0.53mm大口径柱时，柱内流量可达15ml/min，这对微型TCD和单丝TCD来说已经够大了，就没有必要再加尾吹气了。而对于FID、NPD、FPD则需要至少10ml/min的尾吹气的流量，对于ECD就需要20ml/min的尾吹气（ECD一般需要载气总流量大于25ml/min）。使用常规或微径柱时，尾吹气流量应相应加大。经验参考

　　来源：上海市计算技术研究所-色谱仪器事业部 　　高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 　　高效液相色谱（highperformanceliquidchromatography,HPLC）也叫高压液相色谱（highpressureliquidchromatography）、高速液相色谱（highspeedliquidchromatography）、高分离度液相色谱（highresolutionliquidchromatography）等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用

　来源：上海市计算技术研究所-色谱仪器事业部 　高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 　　特点 　　1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。 　　2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。 　　3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 　　4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 　　5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高

　　来源：南京科捷分析仪器有限公司 　　固相多肽合成已经有近50年的历史了，其技术亦比较成熟,多肽合成技术不断完善,从小规模、短肽链合成发展到大规模、长肽链的合成。化学多肽制备蛋白质与从纯化蛋白质开始制备抗体比较，不仅省时省事省钱，而且特异性高。 　　从基因表达、蛋白质纯化到抗体产生至少需要2-3年，而通常从蛋白质序列中选择、合成多肽到制备出抗体，只需2-3个月，而且蛋白质家族成员和种间的特异性不能保证。 　　2003年上市的抗爱滋病药物T-20就是一个全合成的36个氨基酸残基组成的小肽药物。上世纪90年代,组合化学与多肽合成技术相结合后,随着蛋白质组学的研究深入，又出现了组合肽库的合成,对生化、化学、医药、分子生物学等领域起到了巨大的推动作用，对于多肽化学的要求不仅仅是合成方法，在多肽研究发展过程中,对保护氨基酸的要求也不断提高,使之不断改进，而更多的集中在多肽标记与修饰方法，以及蛋白结构与功能模拟多肽的合成以及长肽或蛋白合成。 　　人们的要求已经从合成一些较短的肽链，延伸到了能否利用从生物体合蛋白质的原理，研究合成出人们理想的任意肽段，这也是今后多肽合成的发展趋

　　来源：南京科捷分析仪器有限公司 　　使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。 　　涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。 　　液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。 　　反相色谱法 　　一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、异丙醇、乙腈、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。 　　随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品

　　来源：中国化工仪器网 　　1、能力验证的概念 　　能力验证是利用实验室间比对确定其检测能力。所谓实验室间比对是按照预先规定的条件，组织两个或多个实验室对相同或类似的样品进行检测或测量，并且评定其结果。能力验证计划包含测量比对计划、实验室间检测计划、分割样品检测计划、定性计划、已知值计划、部分过程计划等六种类型。认可机构、法定机构和其他组织在检测领域应用能力验证时，通常采用实验室间检测计划。 　　2、能力验证的组织和运作 　　为组织和运作一个能力验证计划，能力验证提供者首先应成立技术和统计专家组，负责对能力验证计划方案的设计、样品的制备、均匀性及稳定性检验;负责能力验证数据处理的统计设计和能力验证结果的评定。 　　2.1能力验证方案设计 　　能力验证计划的方案设计是能力验证计划能否取得成功的基础。经能力验证提供者专家组探讨后，应将具体方案文件化，作为整个能力验证计划组织和运作过程的指导。 　　2.2样品的制备 　　样品是能力验证的基础，应与实验室日常检测的样品相同或相似。为保证能力验证计划结果的准确性，计划所提供测试样品的均匀、稳定是利用实验室间比

　　来源：中国化工仪器网 　　化学分析方法的分类 1.定性分析和定量分析定性分析的任务是鉴定物质是由哪些元素或化合物所组成的；定量分析的任务则是测定物质中有关组成的含量。钢铁冶金实验中最常用的是定量分析。 2.常量分析，半微量分析和微量分析根据试样的用量及操作方法不同，可分为常量、半微量和微量分析。各种分析操作时的试样用量如表7―l所示。在无机定性化学分析中，一般采用半微量操作法，而在经典定量化学分析中，一般采用常量操作法。另外，根据被测组分的质量分数，通常又粗略分为常量（大于1％）、微量（0．01％~1％）和痕量（小于0．01％）成分的分析。 3.例行分析、快速分析和仲裁分析例行分析是指一般化验室日常生产中的分析，又叫常规分析。快速分析是例行分析的一种，主要用于生产过程的控制。例如炼钢厂的炉前快速分析，要求在尽量短的时间内报出结果，分析误差一般允许较大。仲裁分析是不同单位对分析结果有争议时，要求有关单位用指定的方法进行准确的分析，以判断分析结果的准确性。在仲裁分析时，推确度是主要矛盾。 4.化学分析和仪器分析以物质的化学反应为基

　　　　来源：中国化工仪器网 PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 　　污染原因 　　一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 　　二、PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。 　　三、PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大（一般为1013拷贝/ml），远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。 　　还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶

　　来源：中国化工仪器网 　　基线：在色谱操作条件下，没有被测组分通过鉴定器时，记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。 　　相、固定相和流动相：一个体系中的某一均匀部分称为相；在色谱分离过程中，固定不动的一相称为固定相；通过或沿着固定相移动的流体称为流动相。 　　色谱峰：物质通过色谱柱进到鉴定器后，记录器上出现的一个个曲线称为色谱峰。 　　死时间、保留时间及校正保留时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间，以td表示。从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间，以tr表示。保留时间与死时间之差称校正保留时间。以Ｖd表示。 　　峰高与半峰宽：由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交点间的高度称为峰高，一般以h表示。色谱峰高一半处的宽为半峰宽，一般以x１／２表示。 　　死体积，保留体积与校正保留体积：死时间与载气平均流速的乘积称为死体积，以Ｖd表示，载气平均流速以Ｆc表示，Ｖd=tdxFc。保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积，以Ｖr表示，Ｖr=trxFc。 　　峰面积：流出曲线（色谱峰）与基线构成之面积称峰面积，用Ａ表示。

程序控制器是系统的硬件部分。它主要包括： (1)微处理器和主机电脑。用于仪器各个单元和总体控制，应具有程控操作、故障诊断、多种数据处理和储存等强大功能。一般根据仪器功能的需要和电脑硬件市场的主流产品来配置。 (2)显示器(CRT monitor unit)。通常用键盘、鼠标、触摸屏等方式进行操作。 (3)系统及配套软件。多采用Windows-NT或windows界面，具全图形化设计，多菜单选择，信息导引，故障报警，帮助提示，人机“对话”，方便直观，不少仪器有即时反应曲线显示。 (4)通过Rs 232 c等数据接口与其他计算机、打印机等设备传输数据。具人工智能双向通讯系统(Host query)，仪器可直接自行向主电脑询问病人／样品基本资料及检测项目。有的具远程通讯及监控功能，可遥控远处测试及维修检查，实现网络工作。 自动生化分析仪均采用程序控制的自动分析。分析程序一经确定，工作时只要简单地输入测定项目或编码，仪器即可按编制程序自动完成测定、计算和报告。具体的控制程序因仪器而异，一般分为固定程序和自编程序两种。固定程序为仪器厂家预先设定，常与指定试