槐定碱有关物质的薄层色谱法研究

　　【摘要】 　　目的建立薄层色谱法检查槐定碱中有关物质的方法。方法采用碱性硅胶G薄层板，苯-丙酮-甲醇（8∶3∶0.5）（氨蒸气饱和）为展开剂，依次喷稀碘化铋钾试液和30%的硫酸乙醇溶液显色。结果主成分与其他生物碱、降解产物的斑点能得到较好的分离。结论该法可用于槐定碱提取工艺、原料和制剂的质量监控。

　　【关键词】  槐定碱 有关物质 薄层色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo establish the method of Thin-Layer Chromatography for sophoridine and its impurities. MethodsLamella of basic silica gel G was adopted. The spread solvent was made of Benzene-Acetone-Methanol (8∶3∶0.5) (They are saturated by ammonia steam). Color display was made by spraying sparse Potassium Bismuth Iodide and followed by spraying  30% sulfuric acid ethanol. ResultsSophordine and its impurities (such as unrelated alkaloid, degradation product) could be separated .Conclusion The method can be used for the quality control of material , preparation and sophoridine extraction process.

　　Key words：Sophoridine；  Impurity；  Thin-Layer Chromatography

　　槐定碱（sophoridine）是一种具有新型结构的抗肿瘤新药，是从豆科槐属植物苦豆子Sophora alopecuroides L.的成熟种子中提取的生物碱。在对新药槐定碱定性定量分析的系统性研究中，曾采用薄层色谱法检查槐定碱中的有关物质，取得了满意的结果。有报道［1］从苦豆子中分得生物碱成分有20种之多，其中主要生物碱是槐定碱、槐果碱、苦参碱等，它们大都含有相似的基本骨架，属于喹喏里西啶（Quiolizidine）类生物碱，也常被称为苦参碱类生物碱，对这类生物碱的薄层色谱分析，国内曾有一些文献报道［2，3］，笔者在有关参考文献的基础上，除比较了不同的吸附剂、展开剂外，主要在显色剂的应用上有一点改进，即增加了通用显色剂30%硫酸乙醇溶液的使用，使槐定碱的薄层色谱中其它杂质均能显现，提高了方法的灵敏度。本法不仅可作为槐定碱提取工艺、原料和制剂的质量监控手段，也可为其他生物碱的薄层色谱分析提供参考。

　　1  药品与试剂

　　硅胶G（青岛海洋化工厂）；其余试剂为分析纯。

　　苦参碱对照品(0805-9703)、氧化苦参碱对照品(0780-9703)由中国药品生物制品检定所提供；槐定碱、槐果碱纯品由江西中医学院吴运光教授提供。槐定碱原料由江西中医学院提供。

　　2  方法与结果

　　2.1  供试品溶液的制备分别取槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱纯品各适量，用三氯甲烷制成2 mg・ml-1的溶液；量取上述各溶液1 ml，混匀即得混合溶液；另取槐定碱适量，置105℃加热破坏3 h，用三氯甲烷制成2 mg・ml-1的溶液。

　　2.2  薄层色谱条件碱性硅胶G（取硅胶G 2 g，加0.4%的氢氧化钠6 ml制成）薄层板，厚度0.2～0.3 mm；展开剂：苯-丙酮-甲醇（8∶3∶0.5）（氨蒸气饱和）上行展开15 cm；显色剂：依次喷稀碘化铋钾试液和30%的硫酸乙醇溶液。

　　2.3  薄层分离实验取上述供试品溶液各10 μl，按上述薄层色谱条件试验，结果显示，主成分与其他生物碱、降解产物的斑点能得到较好的分离。见图1。

　　2.4  最低检测量实验在上述薄层色谱条件下测得槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱的最小检出量分别为0.2，0.5，0.2，0.5μg。

　　2.5  有关物质的限量检查方法取本品，加三氯甲烷制成每毫升中含10 mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取适量，加三氯甲烷制成每毫升中含0.2 mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一碱性硅胶G薄层板上，用苯-丙酮-甲醇（8∶3∶0.5）为展开剂，置氨蒸气饱和的环境中展开，展开后，晾干，依次喷稀碘化铋钾试液和30%的硫酸乙醇溶液，使显色，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于两个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

　　2.6  样品有关物质检查结果检查了10批槐定碱原料，结果均检出一个杂质斑点，颜色均浅于对照溶液的主斑点（即＜2%）。

　　3  讨论

　　3.1 对薄层色谱条件的选择比较了不同的薄层板：硅胶G、碱性硅胶G、中性氧化铝、碱性氧化铝板；不同的展开剂：苯-丙酮-甲醇（8∶3∶0.5）（氨蒸气饱和）、苯-丙酮-醋酸乙酯-甲醇（氨蒸气饱和）、三氯甲烷-甲醇（氨蒸气饱和）、三氯甲烷-甲醇-氨水、石油醚-苯-丙酮-甲醇、三氯甲烷-无水乙醇（氨蒸气饱和）等，结果分离效果以碱性硅胶G板、苯-丙酮-甲醇（8∶3∶0.5）（氨蒸气饱和）为最佳。

　　3.2   对显色剂进行了比较在最佳薄层色谱条件下，分别喷碘化铋钾试液、稀碘化铋钾试液和改良碘化铋钾试液，结果碘化铋钾试液喷后整块板颜色深，微量杂质不易观察；改良碘化铋钾试液显色后，常褪色太快，不够稳定；稀碘化铋钾试液显色效果较好，背景颜色浅，斑点清晰。但是无任用上述哪种显色剂，显色后的斑点均易消褪，尤其是微量杂质斑点不易显现或显色后瞬间消失，不利于观察比较，虽加大点样量，仍不能避免这种情况，致使杂质斑点不易检出。经反复实验，采用了在稀碘化铋钾试液显色后继续喷以30%的硫酸乙醇溶液，结果斑点显色灵敏度增加，微量的杂质斑点也能清晰可辨，而且稳定时间较长。

　　本法与高效液相色谱法［4］比较，后法虽然灵敏度更高，但本法设备简单，价廉，用自身对照法可以满足本品有关物质检查要求。

　　【参考文献】

　　［1］王秀坤，李家实，魏璐雪，等. 槐属植物化学成分研究概况［J］.国外医学・中医中药分册，1996，18（4）：7.

　　［2］陈发奎.常用中草药有效成分含量测定［M］.北京：人民卫生出版社， 1997：396.

　　［3］张中苏，张林英，王润生，等.苦参薄层色谱法的改进［J］.中国中药杂志，1995，20（3）：171.

　　［4］张爱华，张悦晗，陈新菊，等.反相高效液相色谱法测定槐定碱原料及注射液的含量［J］.中国新药杂志，2007，16（1）：68.