薄层色谱法

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一、目的要求
1. 了解薄层层析 分离和鉴定有机物的原理和方法；
2. 掌握薄层层析分离 和鉴定有机物的操作步骤。
二、基本原理
薄层色谱具有设备简单、速度快、分离效果好、灵敏度高以及能使用腐蚀性显色剂等优点，是一种微量的分离分析方法。它可以与光谱或质谱结合起来，是一种很有发展前途的分析技术。
薄层色谱是把吸附剂或支持物（如氧化铝、硅胶和纤维素粉等）均匀地铺在一块玻璃板上形成薄层，将分离样品滴加在薄层的一端，当流动相沿着含有固定相的支持物上移动时，被分离组分就在固定相与流动相之间进行分配或吸附，经过反复无数次的分配平衡或吸附平衡，最后按照各个组分的差异而被分离。
三、基本操作
薄层色谱中，铺薄层的板可用玻璃板，也可用塑料板。铺在板上的吸附剂（或支持物）可分为加粘合剂的硬板和不加粘合剂的软板。薄层色谱技术包括制板、点样、展开、显色等步骤。现分述如下：
1. 薄层板的制备
薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果，薄层应尽量铺得均匀，厚度在0.25～0.5mm之间。
硅胶和氧化铝的粘性差，使用前必须加粘合剂。市售的硅胶G 和氧化铝G 均已含有粘合剂半水石膏，可直接加入水调匀后铺层。

（a）1-玻璃板； 2-厚度垫板； 3-吸附剂； 4-有机玻璃尺
（b）1-玻璃板； 2-玻璃条； 3-有机玻璃尺； 4-吸附剂
（c）1-玻璃板； 2-玻璃棒； 3-控制厚度的金属丝； 4-吸附剂
图2.55 薄层板涂布法

薄层的涂布有倾斜法和平铺法等多种方法。倾斜法是将调匀的糊状物倒在玻璃板上，用手摇晃，使其表面均匀光滑，然后静置固化。平铺法是将调匀的糊状物，倒在玻璃板的一端，用一根均匀的玻璃棒（直径0.6～0.8cm），两端各绕一根不锈钢细丝（0.2～0.3mm）或镍铬丝，将糊状物均匀平铺，即可涂布成均匀的一层。涂布的时间、推移的速度力求均匀一致，最好一次推移完毕，不宜来回操作，如（图2.55c）。按上述方法涂好板后，静置让其固化晾干。
经室温干燥的薄层还要活化，所谓“活化”就是在高温除去水分，硅胶薄层和纤维薄层要在110℃下干燥1 小时，氧化铝薄层在80℃烘烤半小时，聚酰胺薄层要在110℃下干燥5min。活化后的薄层应放在干燥器内保存。

2. 点样
用毛细管或微量注射器取样品溶液，在上述制好的薄层板一端约1.5cm 处，，垂直地轻轻地接触到薄层上的吸附剂，样品溶液就可靠到薄层上。应分次点下，不可一次点得太多，不然样品点直径太大，样点直径一般以2～4mm 为宜。在定性和定量分析时，同一薄层上的样点直径应一致。